RNA提取试剂盒操作的详细步骤

　　RNA提取试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因组，不适合于细胞等组织内RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组RNA可用于RT-PCR实验。

　　RNA提取试剂盒操作步骤

　　使用前请先在漂洗液中加入一瓶新开启的无水乙醇，加入到离瓶口约0.5-1cm距离，盖好摇匀。所有离心步骤均在2-8条件下进行。

　　1、取病毒上清液0.5ml，12000rpm离心5min，尽量吸尽上清使用，弃去沉淀（如无沉淀可省去此步）。

　　2、向病毒上清中加入20ul10mg/ml的蛋白酶K，充分混匀，65消化10min，期间可颠倒离心管混匀数次。

　　3、吸附柱前处理：从包装中取出吸附柱，放入收集管中，加入700ul洗柱液，室温放置2分钟，2-812000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中待用。

　　4、向病毒上清中加入500ul结合液，充分混匀。再向管中加入400ul无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响RNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，静置2min。（吸附柱的最大容积为750ul，可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。）

　　5、12000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

　　6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

　　7、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

　　8、12000rpm离心2min，将吸附柱置于室温或50温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

　　9、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50ul-100ul经65水浴预热的RNasefreeddH2O，室温放置5min，12000rpm离心2min。即可得到高质量的病毒基因组RNA。