Biocoll细胞分离液正确分离方法和操作时的注意事项

　　Biocoll细胞分离液是最早由德国Biochrom公司推出的新一代分离液。它除了可分离淋巴细胞外，更常用于胰岛细胞的分离。胰岛细胞的移植是一种有效的糖尿病新型疗法，可解决特别是I型糖尿病患者的胰岛细胞不足及功能低下的问题。

　　Biocoll细胞分离液分离方法会影响胰岛的产率和存活率：

　　因此，取材时需要注意

　　1.胰脏应快速取材，保持包膜完整。

　　2.对胰脏进行评估，在消化酶灌注前去除多余的脂肪和残留的十二指肠和脾脏。

　　3.消化过程不宜进行震荡，以保证胰腺组织被灌注的消化酶液消化，而不是被胰腺所释放的胰蛋白酶消化。

　　4.要保证胰岛的包膜完整，消化不能太充分。宁可不足，也不可过头，否则会影响胰岛纯化的产率。

　　Biocoll细胞分离液操作步骤及注意：

　　1.取全血，使用等量PBS稀释。（全血：HBSS=1:1）

　　2.取离心管，加入与血稀释液等量的PBS于管底，将血液稀释液小心加至PBS液面上层。（小心不要使两种溶液混合，吸头接近液面，贴壁缓慢加入，尤其是两种溶液刚接触到的时候，一定要慢！慢！再慢！）

　　3.离心：800g，30min，需要将制动降至低，即离心机自然降速至0，离心完毕将得到如图所示分层（一定要自然降速，或者只有1-2成的制动）

　　4.吸取白膜层至新15mL离心管中。

　　5.白膜层液体加10~15mlPBS离心，300g，10min，弃上清。沉淀再加PBS清洗一次，弃上清。

　　6.沉淀加入正常培养的*培养基进行培养，2~3小时，使单核细胞贴壁。

　　7.镜下观察细胞贴壁后，更换培养基，去除未贴壁细胞，保留下来的即为所需的单核细胞。