Biocoll细胞分离液是由德国Biochrom公司推出的新一代分离液。它除了可分离淋巴细胞外,更常用于胰岛细胞的分离。胰岛细胞的移植是一种有效的糖尿病新型疗法,可解决特别是I型糖尿病患者的胰岛细胞不足及功能低下的问题。
特点:
1、提供多种密度的Biocoll细胞分离液,可分离外周血,骨髓和脐带血中的单个核细胞,低密度的基质细胞,间充质干细胞以及啮齿动物的血细胞等。
2、生产过程符合GMP以及美国药典标准,无菌即用,内毒素含量低。
3、分离效果好,所得细胞活性>80%,Ficoll可高压灭菌,有效期长。
应注意如下事项
分离方法会影响胰岛的产率和存活率,因此,取材时需要注意
1.胰脏应快速取材,保持包膜完整。
2.建议采用UW溶液运输。
3.对胰脏进行评估,在消化酶灌注前去除多余的脂肪和残留的十二指肠和脾脏。
4.消化过程不宜进行震荡,以保证胰腺组织被灌注的消化酶液消化,而不是被胰腺所释放的胰蛋白酶消化。
5.要保证胰岛的包膜完整,消化不能太充分。宁可不足,也不可过头,否则会影响胰岛纯化的产率。
1.分别将7mL和10mL
Biocoll细胞分离液(D=1.077g/mL,20℃)放入15mL和25mL的离心管中。
2.将肝素化抗凝全血(50U/mL肝素,无稳定剂)与等体积培养基混合均匀,小心添加在分离液的液面上。
3.1200g离心20min。用巴斯德吸管吸取(70-100%)淋巴细胞富集层(位于血浆和Biocoll之间),加入培养基中洗2次,*300g离心10min.*200g离心10min,即得所需淋巴细胞,可以按常规方法进行细胞计数等实验。