hiPSC向心肌细胞分化过程中lncRNA的变化，支原体检测试剂盒助力科研

长链非编码RNA (Long non-coding rna, lncRNAs)是数量最多、种类很多的一类非编码RNA。它们定位于细胞核、细胞质或两个区室，并通过多种机制在多个水平上调控基因表达。LncRNAs往往比蛋白质编码基因进化得更快，并且具有更高的组织和发育阶段特异性表达。lncRNA最初被认为是错误转录的副产物，没有生物学功能，现在被认为参与了许多生物学过程，如免疫反应、细胞凋亡、多能性、重编程和分化。在这项研究中，我们重点研究了心脏制动lncRNA 1 (HBL1)，这是一种近期报道的调节多能干细胞向心肌细胞分化过程的lncRNA。

近日，发表在《Scientifc Reports》上，标题为：“Dynamic changes in LINC00458/HBL1 lncRNA

expression during hiPSC diferentiation to cardiomyocytes"的文章中，科研人员使用RT-qPCR和高分辨率RNA FISH来监测分化过程中HBL1的表达和定位。研究结果表明，HBL1表达在中胚层和心脏中胚层阶段显著增加，在预期的分化细胞减少之前。在细胞核和细胞质中分别检测到RNA的离散灶。在后一个隔间中，我们观察到HBL1与Y-box结合蛋白1 (YB-1)共定位，这可能是RNA和蛋白质相互作用的结果，因为在RNP-IP实验中发现两者共免疫沉淀。最后，我们提供的证据表明，HBL1最初被报道为一个独立的lncRNA基因，是LINC00458(也称为lncRNA-ES3或ES3)基因的一部分，形成一些LINC00458剪接异构体的最后外显子。

其中，科研人员将买来的内皮祖细胞(来源于外周血)建立的人iPSC细胞系，于Essential 8™Flex培养基中，用重组人玻璃体连接蛋白(rhVTN-N)上进行培养。流式细胞术检测细胞中Oct3/4和Sox2的表达，用德国MB公司生产的Venor GeM qEP试剂盒检测支原体的表达，检测细胞的多能性水平。根据Ref.13发表的方案将hipsc分化为心肌细胞。简单地说，用3 μM CHIR99021在CDM3培养基中(RPMI 1640中添加500 μg/mL重组人白蛋白和213 μg/mL l -抗坏血酸2-磷酸)处理90%融合度的hiPSCs 48 h。在CDM3培养基中处理24 h后，用4 μM IWR-1在CDM3培养基中处理48 h。细胞在CDM3培养基中培养48 h后，在添加B-27的RPMI培养基中培养。此外，在相同的条件下，从外周血单核细胞(PBMCs)重编程的另一种hiPSC系被培养和分化。