如何让细胞更健康？清除实验室污染很重要

细胞培养的成功与否直接关系到实验结果的准确性和可重复性。微生物污染是影响细胞培养健康的重要因素之一。因此，在实验室工作和细胞培养过程中，高效预防或清除微生物污染十分重要。本期内容，一起来讨论细胞实验室中，预防、清除微生物污染的好方法。

一、如何预防细胞实验中的微生物污染

1、用科学有效的方法清洁实验环境

我们汇总了各大实验室的工作流程，希望可以给各位科研工作者提供参考：

实验室环境定期清洁：定期使用 Mycoplasma-off™支原体祛除喷雾剂（或湿巾），对工作区域消杀（建议半个月一次，但需根据细胞间实际使用频率决定）。

实验开始前的灭菌工作：每次实验开始前，和实验结束后，用紫外线对细胞间进行照射消毒，实验操作前用酒精或Mycoplasma-off™支原体祛除喷雾剂对操作人员的手套进行喷涂消毒。

实验仪器的定期清洁：在水浴锅或培养箱水槽的水中，加入 0.5% 的 Water Shield™水槽支原体预防祛除试剂，可确保一个月内水源不会变成支原体、真菌或细菌的污染源。液氮罐也应定期用Mycoplasma-off™支原体祛除喷雾剂（或湿巾）进底消杀，并更换洁净的液氮，（液氮罐中冻存的细胞发生支原体污染，也会在液氮中引起污染的传播）。

2、选择合格的实验试剂

生物学实验很大程度上依赖各类生物学试剂的支持，其中，胎牛血清作为一种十分常见的生物学试剂，在细胞培养实验中发挥着重要作用，可以维持细胞的生长和健康。选择高品质的胎牛血清，能够尽可能降低细胞污染的风险。以实验室常用的Ausbian进口胎牛血清为例，通过经7次加压过滤，最后3次为0.1 µm无菌过滤处理，通过严格的质量检测，所有微生物检测均为“未检出"，有许多实验长期使用，为众多科研用户发布高水平文章提供支持。

3、严谨规范的实验操作

实验开始前：在正式进入细胞间前，需要在缓冲隔离间佩戴好细胞实验室专用的防护用具：口罩、防护服、鞋套等，开始实验前，佩戴好手套。

实验进行中：严格按照实验室的规章制度进行实验操作，注意不要交叉污染试剂，另外实验安全、实验垃圾的处理也要格外注意。

实验结束后：用Mycoplasma-off™支原体祛除喷雾剂是所使用过的实验台面、物品表面进行清洁。

二、如何祛除细胞中的微生物污染

当细胞被细菌、真菌或是支原体污染后，都不建议继续培养，尽量能够直接销毁，并对实验环境进行全面地清洁消毒。多数情况下，被真菌或细菌污染的细胞，“发病"迅速，还没来得及拯救，细胞就会集体“阵亡"。因此，如果细胞十分珍贵，不能随意丢弃，也建议仅对支原体污染的细胞进行拯救。

祛除细胞中支原体的有效方法：

1、对于非常珍贵的细胞株（不可再得的）国际上使用 Mynox® Gold珍贵细胞株支原体清除试剂，做 4 周左右的支原体祛除持续培养实验。

2、对于非常珍贵的细胞株或生物样品（无法长期培养的），可使用 Mynox®珍贵生物样品支原体清除试剂，对细胞做 3 小时左右的祛除支原体处理，处理完毕，冲洗细胞，将样品放入洁净的培养液中，重新培养或保存即可。

3、对于已经进行到中途的细胞实验，如果将培养的大量细胞丢弃，会造成高昂的实验成本损失。对于这样的情况，补救办法如下：在培养液中加入 10% 的 Zell Shield®细胞支原体祛除试剂（一种新型复合抗生素）。按照厂家建议“悬浮冲洗"方法，配合处理细胞，培养 4 代以上，基本可祛除支原体污染。

悬浮冲洗法：

细胞消化后，将细胞转移至离心管进行离心，弃上清，加入PBS冲洗细胞后再次速离心弃上清，重复PBS冲洗过程3次后，用新鲜的含Zell Shield®细胞支原体祛除试剂的细胞培养液进行培养传代

①Zell Shield®细胞支原体祛除试剂常规为-18℃保存，建议使用前，先融化分装，仍旧-18℃避光保存，使用时按需融化配制。避免反复冻融。

②Zell Shield®细胞支原体祛除试剂按1:100浓度可直接加入培养基。例如：500ml培养基中添加5ml Zell Shield®细胞支原体祛除试剂，50mL/瓶的Zell Shield®细胞支原体祛除试剂可供5L培养基使用。

4、一些做原代培养的实验室，为了预防取原代细胞过程中可能会发生支原体污染，实验人员也可以在培养液中加入 10% 的 Zell Shield®（一种新型复合抗生素），培养 4 代以上，即可撤掉 Zell Shield®，此过程可有效预防支原体污染的发生。