内毒素是细菌产生的,在细胞培养过程中,容易在血清中出现。血清中如果含有大量内毒素,则会对细胞培养造成严重的影响。因此,选择内毒素含量低的血清,对细胞培养十分重要。Ausbian进口特级胎牛血清,内毒素含量低,≤3EU/ml,澳洲血缘。
最近发现的许多细菌抗病毒系统在结构和功能上都与后生动物先天免疫的成分具有同源性。这种祖先联系的一个例子包括细菌中的CBASS,它类似于后生动物中环GMP-AMP合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)抗病毒途径。CBASS包含两个核心成分:cGAS/ dncv样环核苷酸转移酶(CD-NTase,也称为Cdn)酶,在病毒(噬菌体)感染时产生环核苷酸,以及结合环核苷酸触发宿主死亡或生长停滞从而抑制病毒繁殖的效应蛋白。除了环化酶和效应基因外,CBASS操纵子还可以编码辅助蛋白,用于将其分为四种主要类型,I-IV。
环核苷酸免疫的一个核心方面是环化酶的激活机制,也就是说,酶如何感知病毒感染,开始合成第二信使。对于人类cGAS,这是通过与存在于细胞质中的病毒双链DNA直接相互作用来实现的。然而,在动物中存在的其他cGAS同源物可以感知RNA而不是DNA。然而,在细菌CBASS应答过程中,环化酶激活的机制尚不清楚。
近日,科研人员对来自多种不同CBASS操纵子的细菌环化酶的生化分析表明,其中一些酶在体外具有组成性活性,这表明它们在体内的活性受到负调控,只有在噬菌体识别时才会释放出来。相反,也有许多CBASS环化酶在体外失活的例子,因此必须需要一种激活机制来启动免疫反应。该研究对葡萄球菌中I型CBASS环化酶的激活机制进行时揭示。
相关研究发表在《Nature》上,文章标题为:“Bacterial cGAS senses a viral RNA to initiate immunity"。