支原体DNA提取——德国MB Venor GeM Sample preparation Kit使用指南

更新时间：2023-09-29 | 点击率：409

研究表明，37%的细胞培养上清和几乎所有的混合细胞培养上清，都存在抑制PCR的物质。因此，在对细胞或者细胞产物，进行支原体PCR检测前，需要进行DNA提取。

产品名称：支原体DNA抽提试剂盒

英文：Venor®GeM Sample preparation Kit

品牌：Minerva-Biolabs®

货号：56-1010

规格：10次/盒

产品用途

细胞培养基随着时间的延长，可能积聚抑制 PCR 的物质。

已知血清含量大于 12%的培养基对下游操作（例如 PCR）有抑制作用。而且，培养基中的酚红，对 qPCR 的荧光检测也可能发生交叉反应，产生假阳性。这些弊端可通过支原体 DNA 提取试剂盒来克服

从细胞培养物和生物药中提取支原体 DNA，和支原体检测试剂盒配套使用。提高支原体检测的灵敏度、一致性和特异性。

作用原理

该试剂盒对支原体DNA的提取，主要由以下四步组成：

1、细胞裂解

2、DNA 吸附到核酸纯化柱上

3、去除残留污染物和抑制剂

4、DNA 洗脱。此方法无须酚/氯仿抽提，只需 30 分钟即可完成制备，提供 PCR所需的 DNA。

使用方法

一、样本要求

支原体 DNA 提取试剂盒可从数量上限为 1X 10^6 细胞/ml，体积上限为 500μl的细胞上清中，直接分离 DNA。

通常，细胞培养物应尽快进行 DNA 抽提。

在 95℃加热 10 分钟以使之稳定，继而在室温可放 1 周。富含蛋白的样本（蛋白含量＞10mg/ml）可能需要蛋白酶 K 处理后，再抽提 DNA（请参照后面的流程）。注意，此试剂盒不适于提取真核细胞组织的 DNA。

二、操作步骤

新试剂盒拆封后，向缓冲液 A1 和缓冲液 A2 加入无水乙醇。将恒温仪设置到 70℃。使缓冲液 E 加热到 70℃。

1、200μl 样本+200μl 调节液，涡旋振荡 10 秒。

2、摇床孵育70℃，10 分钟。

3、加 400μl 吸附缓冲液，涡旋振荡 10 秒。

4、将液体转移到核酸纯化柱，离心10000g，1 分钟，弃掉流过的液体。

5、加500μl缓冲液A1，离心10000g，1 分钟，弃掉流过的液体。

6、加500μl缓冲液A2，离心10000g，1 分钟，弃掉流过的液体。

7、最大速度离心，3 分钟

8、换管。

9、加 60μl 缓冲液E，孵育 2 分钟。

10、离心8000g，2分钟。

11、DNA即可用于PCR。

三、注意事项

👉提供的试剂不能和其他批号的试剂混和。

👉使用的试剂不要超过效期。

规范操作流程，任何提取流程上的偏差都会影响到结果。

👉我们推荐使用对照品，以验证结果的可靠性。它也有助于排除故障。

👉不要使用其他酒精来替代乙醇，它将导致核酸产量的下降。

👉缓冲液 E 的预热，会很大程度上改善核酸的产量。