细胞支原体去除试剂——Mynox使用指南

德国Minerva Biolabs公司生产的Mynox®是一种支原体去除剂，用于消除细胞、病毒培养物、以及其他生物制剂中的支原体。支原体消除只需6 - 8天(加上4代DNA冲洗)。处理后，Mynox®很容易通过介质更换去除。

Mynox®是一种无抗生素的生物试剂，可以整合到支原体膜中，损害其完整性。它的活性基于生物物理机制，因此不会产生耐药菌株。其结果是渗透性内流导致支原体膜解体。被清除支原体，细胞可以立即恢复其原有的形态和正常增殖速度。迄今为止，Mynox®尚未显示会导致正常细胞特性的任何变化。

一、贴壁细胞的处理方法

1、制备细胞和『治疗液』

在无菌的6厘米培养皿中加入2.8 ml含5% (v/v) FCS的标准细胞培养基。加入200µl Mynox®(1瓶)。

加入2ml新鲜胰蛋白酶化的10^4 - 10^5个细胞。

包括细胞在内的处理混合物的总体积为5ml。

2、Mynox®的处理和去除

在正常生长条件下，将细胞与『治疗液』混合物保持一整个传代过程(约6至8天)。然后除去含有Mynox®的培养基，将细胞在标准培养基中传代。8天为上限，若细胞未长满皿底，终止处理，丢弃含有Mynox®的培养基，并添加新鲜的标准细胞培养基。

二、悬浮细胞系的处理

1、制备细胞和『治疗液』

使用无菌离心管配制『治疗液』。加入1.6 ml 0.125%胰蛋白酶和5 mM EDTA。加入200µl Mynox®(1瓶)。将1.6 ml含有10% (v/v) FCS和10^4 - 10^5细胞的标准细胞培养基，从悬浮细胞培养液中转移到『治疗液』混合物中，进行涡旋。包括细胞在内的处理混合物的总体积为3.4 ml。

2、Mynox®的处理和去除

37℃孵育30分钟。将细胞轻离心(600 × g) 5分钟，丢弃上清。将细胞重悬于不含Mynox®的标准细胞培养基中，置于培养瓶中。

三、非包膜病毒的处理

冷冻或新鲜等量的细胞和无细胞碎片的病毒悬浮液可以处理。病毒滴度不影响治疗的成功。

1、制备细胞和『治疗液』

使用1.5 ml带安全锁的无菌反应管配制消毒液。加入1 ml不含FCS的细胞培养基。加入100µl Mynox®。

将含有8% (v/v) FCS的125µl病毒原液转移到混合物中。漩涡。包括病毒原液的处理混合物的总体积为1.225 ml。

2、Mynox®的处理和去除

在室温下将消去液孵育2小时。将处理混合物在培养基中稀释1:10，停止反应。

四、包膜病毒的处理

包膜病毒外脂膜的组成与Mynox®的靶标支原体膜相当。这些病毒也容易受到Mynox®灭活的影响，具体取决于所使用的处理时间和浓度。为了获得无支原体的病毒悬浮液，并具有可接受的继代培养水平，初始病毒滴度应高于10^6 TCID50。

冷冻或新鲜等量的细胞和无细胞碎片的病毒悬浮液可以处理。

1、制备细胞和『治疗液』

使用无菌15ml螺旋盖反应管配制消去液。加入4.4 ml不含FCS的细胞培养基。加入100µl Mynox®。将0.5 ml含有8% (v/v) FCS的病毒原液转入混合物中。漩涡。包括病毒原液的处理混合物的总体积为5ml。

2、处理和Mynox®去除

在室温下将消去液孵育30分钟。将处理混合物在培养基中稀释1:10，停止反应。

五、支原体检测

经Mynox®处理的细胞培养物和病毒库应在不使用抗支原体抗生素的情况下再培养四代，然后检测支原体是否存在以验证培养纯度。

对于高灵敏度的支原体污染检测，我们推荐使用基于pcr的Venor®GeM支原体检测试剂盒