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不同PCR技术该怎么选?这些关键点要注意!

更新时间:2023-06-16  |  点击率:603
聚合酶链反应(PCR)是一种重要的分子生物学技术,广泛应用于基因分析、疾病诊断和生物学研究、生物学检测等过程中。

随着科学的发展,PCR的变种技术也不断涌现。

本文将介绍PCR、实时荧光PCR(qPCR)和数字PCR(dPCR)这三种方法的区别。
各类PCR简介
普通PCR:
普通的PCR是一种在体外扩增特定DNA序列的技术。它包括三个步骤:变性、退火和延伸。通过使用引物、DNA模板和DNA聚合酶,可以在热循环过程中多次复制目标DNA,从而快速扩增特定片段。

qPCR:
qPCR是PCR的实时荧光变种。它通过在PCR过程中引入荧光探针,实时监测扩增反应的进程。这种荧光探针与目标DNA序列的特定区域结合,当DNA扩增过程中的荧光信号增加时,可以定量测量目标DNA的存在量。

dPCR:
dPCR通过将PCR反应分割成许多微小反应,使每个反应中只包含少量的DNA分子。通过计数阳性和阴性反应的数目,可以对目标DNA的存在进行定量。dPCR通常使用荧光探针等来标记反应产物。

基本原理是将稀释后的核酸溶液,分散至芯片的微反应器或者微滴当中,每个反应器仅含有微量的核酸模板数。经过PCR扩增之后,有一个核酸分子的模板的反应器就会发出荧光信号,没有模板的反应器没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积,可以推算出原始溶液的核酸浓度。

不同PCR技术的区别
检测方法:PCR和qPCR都是间接检测方法,依赖于荧光探针或染料的结合和信号产生。而dPCR是直接计数阳性和阴性反应的数目,不需要参考标准曲线或标准样品。

定量精度:qPCR具有较高的定量精度,可以准确测量目标DNA的存在量。dPCR则具有更高的精确性和灵敏度,可以实现绝对定量,但对样本量的需求较高。

灵敏度:dPCR通常比qPCR更敏感,能够检测低丰度的目标DNA。

成本和复杂度:PCR和qPCR的成本相对较低,仪器设备和试剂较为普及。而dPCR需要更高的投入成本,并且设备和操作相对复杂。

样本处理:qPCR通常需要对样本进行前处理,如提取和纯化DNA,以获得较好的扩增效果。而dPCR对样本的处理要求较低,可以直接使用复杂的样本。


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