不同PCR技术该怎么选？这些关键点要注意！

更新时间：2023-06-16 | 点击率：603

聚合酶链反应（PCR）是一种重要的分子生物学技术，广泛应用于基因分析、疾病诊断和生物学研究、生物学检测等过程中。

随着科学的发展，PCR的变种技术也不断涌现。

本文将介绍PCR、实时荧光PCR（qPCR）和数字PCR（dPCR）这三种方法的区别。

各类PCR简介

普通PCR：

普通的PCR是一种在体外扩增特定DNA序列的技术。它包括三个步骤：变性、退火和延伸。通过使用引物、DNA模板和DNA聚合酶，可以在热循环过程中多次复制目标DNA，从而快速扩增特定片段。

qPCR：

qPCR是PCR的实时荧光变种。它通过在PCR过程中引入荧光探针，实时监测扩增反应的进程。这种荧光探针与目标DNA序列的特定区域结合，当DNA扩增过程中的荧光信号增加时，可以定量测量目标DNA的存在量。

dPCR：

dPCR通过将PCR反应分割成许多微小反应，使每个反应中只包含少量的DNA分子。通过计数阳性和阴性反应的数目，可以对目标DNA的存在进行定量。dPCR通常使用荧光探针等来标记反应产物。

基本原理是将稀释后的核酸溶液，分散至芯片的微反应器或者微滴当中，每个反应器仅含有微量的核酸模板数。经过PCR扩增之后，有一个核酸分子的模板的反应器就会发出荧光信号，没有模板的反应器没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，可以推算出原始溶液的核酸浓度。

不同PCR技术的区别

检测方法：PCR和qPCR都是间接检测方法，依赖于荧光探针或染料的结合和信号产生。而dPCR是直接计数阳性和阴性反应的数目，不需要参考标准曲线或标准样品。

定量精度：qPCR具有较高的定量精度，可以准确测量目标DNA的存在量。dPCR则具有更高的精确性和灵敏度，可以实现绝对定量，但对样本量的需求较高。

灵敏度：dPCR通常比qPCR更敏感，能够检测低丰度的目标DNA。

成本和复杂度：PCR和qPCR的成本相对较低，仪器设备和试剂较为普及。而dPCR需要更高的投入成本，并且设备和操作相对复杂。

样本处理：qPCR通常需要对样本进行前处理，如提取和纯化DNA，以获得较好的扩增效果。而dPCR对样本的处理要求较低，可以直接使用复杂的样本。