细胞培养基中双抗浓度是多少？该怎样添加？

细胞培养基中，将常会添加“双抗"用于预防微生物污染。细胞培养过程中用到的双抗，一般是指青霉素和链霉素的组合。主要作用于细菌的细胞壁与核糖体。由于真核细胞没有细胞壁以及核糖体与原核细胞不同，抗生素一般对真核细胞培养无害。

在细胞培养液中，一般推荐的青霉素的工作浓度为100U/ml，链霉素的工作浓度为0.1mg/ml。在使用时，按需配制或稀释即可。另外，需要注意的是，抗生素对热环境比较敏感，因此应在-20℃环境下长期保存，在2-8℃可短期保存，配制成培养液后应在一周内用完。

虽然在细胞培养过程中，双抗被广泛使用，并且认为对真核细胞无害，但已有研究表明，β-内酰胺类抗生素及氨基糖甙类抗生素，对真核细胞培养有抑制增殖作用。并且这种抑制增殖作用在原代细胞和干细胞等难养细胞上尤其明显。2017年，加州大学Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上发表文章，呼吁在细胞培养过程中减少抗生素的使用[4]。他们发现抗生素（“双抗"：青霉素和链霉素）的使用影响人体肝细胞中基因表达与基因调控。其中有209个基因的表达发生了改变，特别是与药物和应激反应相关的基因。超过9,500个基因调控元件发生了变化，并且很多调节元件位于参与细胞分化，核酸酶活性和tRNA修饰的基因附近。虽然这些基因的数量在庞大的细胞基因库中不值一提，但这绝对不是一个应该被忽略的事件。

因此，在细胞实验中，应减少“双抗"的使用，可通过其他方式，预防细胞发生污染。定期用支原体祛除试剂清洁、擦拭实验台；合理的消毒；规范的实验操作等，都有利于预防细胞污染。

德国MB支原体预防试剂，Mycoplasma-off，不仅能祛除支原体，对其他微生物也有效。