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警惕细胞培养过程中的『隐形刺客』

更新时间:2023-04-01  |  点击率:374

毒素(Endotoxin)是革兰氏阴性菌的细胞壁外壁层上的结构,又被称为脂多糖或者“热源",是由菌体裂解后释出的毒素,单位EU/ml。内毒素耐热,曾有人做过实验,在100℃的高温下加热内毒素1小时,也不会破坏其结构。

细胞培养中,培养体系中可能会收到内毒素的干扰。生物实验室中,内毒素主要来自于各类配试剂所用的水、各类培养基、血清及其他添加剂、实验器皿表面等。

内毒素更像是一个“隐形的刺客",日常实验中不显山露水,关键时刻很可能对实验结果造成“致命一击",导致结果出现偏差,影响实验稳定性。


内毒素对细胞的的影响

培养体系中的内毒素侵染细胞后,会影响细胞的生长繁殖,可能会引起细胞型态的改变,导致细胞收缩;也可能会引发细胞应激反应,导致信号通路的改变;还有可能影响蛋白的表达调控。

此前,有人做过实验,来观察内毒素对细胞培养的影响,记录的影响包括:刺激白细胞培养物产生组织因子、激活鼠巨噬细胞,以及通过低水平的内毒素抑制鼠类红细胞集落形成等一系列指标。

从现有的研究可以看出,内毒素对于细胞培养影响还是很大的:改变细胞外形、活化细胞、产生讯息传递物质、抑制酶活性、抑制人工受精的成功率等。

血清中内毒素含量过高,更容易导致细胞“亚健康",造成数据不准,或细胞状态不良、老化、甚至死亡,导致试验中断失败。所以要尽量选择内毒素低的血清。

Ausbian血清

血清可能会成为细胞培养过程中,内毒素的来源,因此,在选择血清时,要重点关注内毒素指标。


以下几类情况更应关注内毒素的影响:

1、养干细胞时,干细胞对内毒素非常敏感,如果血清中内毒素≥3EU/ml时,干细胞很容易死亡。

2、养免疫细胞时,过高的内毒素可诱导免疫细胞释放炎症因子,抑制小鼠红细胞集落的形成等。

3、基因敲除相关的细胞实验,培养的细胞要尽可能保持其原始状态,任何引导细胞衰老或凋亡的试剂,都会让后续的实验结果“失之毫厘,谬以千里"。在准备血清和其他试剂时,选择极低的内毒素(最好≤1EU/ml),对实验至关重要。

4、原代培养、杂交瘤融合、细胞转染,或者肝细胞、神经细胞、内皮等难养细胞的扩增,这些都需要挑选好的血清给细胞以有力支持。因此,挑选更低的内毒素,是保证实验顺利的第一步。

5、实验室有些细胞,需要长期培养、长期冻存,或者经常复苏、经常培养的,血清会经常或长时间作用于细胞。为保证细胞的健康,都应该选用更低内毒素的血清,以避免内毒素长久对细胞的毒性影响。


Ausbian进口特级胎牛血清,所有血清出厂前,均经过严格质控,每个批次附有详细完整的《检测报告》,对内毒素标准及含量有明确的标识,精选内毒素≤3EU/ml的批次,降低对细胞的影响。



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