细说《欧洲药典》中『培养法』支原体检测

近些年来，生物医药行业发展迅速，细胞治疗、抗体药物治疗成为研究热门。随之而来生物制品安全控制，成为相关从业者关注的焦点。

支原体因其隐蔽性高、分布广泛的特点，一直以来，在检测方面存在着困难。但对于涉及细胞培养的生物制品等工艺过程，支原体检测势在必行。各国药典中，都对相关生物制品的支原体检测做出了规定。本期内容，我们就来详细讲讲，《欧洲药典》中支原体检测方法——培养法。

《欧洲药典》中，对于培养法有许多限制与规定，总结为如下几点：

1、确保在所选择的培养条件下可能存在于待检测产品中的少量支原体生长

2、液体介质必须含有酚红。

3、所选择的培养基范围至少能满足以下几种微生物生长的营养需求，即满足测试菌株的生长条件，对每一批新培养基进行营养特性测试。

培养条件如下：

液体培养：在35-38°C的密封容器中培养。

固体培养：在35-38°C的微亲氧条件下(含5- 10%二氧化碳的氮气和足够的湿度以防止琼脂表面干燥)培养。

《欧洲药典》中规定，支原体培养法检测，所用的需要进行营养特性实验（特异性验证）、抑制物质实验（耐用性）的验证，才有说服力。

另外，待检测的样品也需要进行一定处理。

从实验原理看，培养法检测支原体有以下特点：

优点：灵敏度高

缺点：只能检测活的支原体

药典中提到，经过验证，NAT法可以替代培养法进行支原体检测。

德国MB的支原体qPCR检测试剂盒：Venor®Gem qEP，通过《欧洲药典》方法学验证，涵盖培养法的同时，规避其短板。