支原体qPCR检测——灵敏度标准品

生物药以及细胞治疗相关企业，正越来越多地采用核酸法，进行支原体检测和生产质控。

根据药典规定，如果要用核酸法替代药典方法，则需对核酸法进行方法验证。

根据欧洲药典和日本药典中的要求，如果用NAT法（核酸扩增检测的英文简称，包括PCR/qPCR）替代培养法检测支原体时，NAT法的检测灵敏度需达到10CFU/ml，在此情况下，需要用到10CFU/ml支原体灵敏度标准品。

德国MB 10CFU支原体灵敏度标准品为灭活支原体，产品本身不会引起实验室的支原体污染。它用于核酸法的灵敏度和耐用性验证。它每盒含3管10CFU支原体冻干粉，2管阴性对照。

标准品复溶后作DNA抽提（采用MB公司的Venor®GeM Sample Preparation Kit），再用符合药典标准的qPCR试剂盒检测，应保证有扩增曲线。

注意事项

1、为尽可能提高灵敏度，在做PCR扩增前，样本需要DNA抽提。

2、由于支原体是经过灭活的，因此，10CFU灵敏度标准品不适合培养法。

3、因为EP 2.6.7/JP G3中，并没有包含DNA水平的信息，因此10CFU灵敏度标准品是依据CFU进行的定量，而非依据基因组拷贝数。

4、未拆封的试剂盒组分应在2—8℃条件下保存。