浅谈『临床项目申报』中的支原体检测

临床项目申报与支原体检测

细胞体外培养过程中，很容易受到支原体污染的困扰。

在生物制品和细胞治疗领域，支原体检查是保证产品和治疗安全的重要一环。生物源性原材料、采用细胞培养技术制备的疫苗、抗体，以及细胞或基因治疗产品在生产过程的不同阶段都要进行支原体污染的检查。

欧洲药典规定对细胞治疗产品需要进行严格的支原体检测；美国FDA规定为了提高细胞生物制品安全性，需要进行支原体污染检测；我国药典规定主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床治疗用细胞应进行支原体检测。

但在项目申报前，需要进行支原体检测。

传统支原体检查方法是培养法和指示细胞培养法，并为药典所认可和收录。但由于这两种方法耗时又耗力，因此，近年来，『支原体qPCR检测』在工业领域的应用越来越多。

但在项目申报前，先需要进行方法学验证，依据药典，在检测限、特异性和耐用性方面达到要求后，才能替代传统的检查方法。

适合临床项目申报的支原体检测和方法验证，德国Minerva Biolabs（简称德国MB）公司已有成熟的产品及商业化应用。

不仅提供有符合国际药典的『支原体qPCR检测』试剂盒，更有一系列支原体标准品及辅助产品，用于qPCR方法的全面验证。

各国药典对支原体核酸扩增检测方法（简称NAT法）的验证要求略有出入，但均要求对检出限、特异性和耐用性进行验证。

在检测方法上，均建议先做样本的支原体DNA抽提，再进行支原体检测。

如使用商品化试剂盒，则除了需要试剂盒生产商提供完整的方法学验证数据外，还需要使用者验证试剂盒对其样本的适用性，以及试剂盒表现出预期的性能（例如检测限、耐用性、是否存在与细菌的交叉反应）进行证明。

德国MB公司提供有10CFU检测限的支原体高敏标准品，可同时用于检测限和耐用性的验证。