贴壁细胞怎么高效传代？

贴壁生长的细胞，在培养瓶或者培养皿长至单层铺满的状态后后，空间已基本上饱和，细胞生长、增殖受阻，为使其继续扩增或生长，需要进行传代（再培养）处理。同时，传代培养也可用于细胞种的保存。不仅如此，各种细胞实验也是以高效的细胞传代为基础的。

悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞则需经消化等处理后才能分瓶。一般使用胰蛋白酶，将贴壁细胞消化成成单个细胞，也可加入EDTA提高消化能力（EDTA 是一种二价离子的螯合剂，能抑制细胞膜上的Ca2+和Mg2+）。常用的细胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA。

实验时，先用吸去细胞培养上清，用PBS清洗细胞，弃掉洗涤液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(根据培养皿的大小不同，一般2-5ml消化液即可，以刚好铺满整个皿底为原则)，观察细胞直到细胞变圆脱离瓶壁，此过程一般需要3-5分钟，为了避免细胞成团，消化细胞的过程中不要拍打细胞瓶。对于特别难消化的细胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把细胞置于37°C 促进消化，细胞脱离瓶壁后，立刻加入含有血清的培养基中止消化。

800-1000rpm，离心5分钟，然后弃去中止用的培养基，加入适合的新的培养基轻轻混匀细胞，移入到新的培养瓶。传代的比例视细胞类型而定。胰蛋白酶会对某些细胞的细胞膜产生损伤，对于这种类型的细胞，可用细胞刮轻轻刮下细胞，加入适量的培养基，轻轻吹打混匀细胞，然后进行传代培养。

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