支原体qPCR检测的仪器设置和注意事项

目前在市场上，有一款支原体qPCR检测试剂盒(英文品名：Venor®Gem qEP，厂家：德国MB) 广受药厂的欢迎。

该试剂盒经过全面的方法学验证，符合欧洲药典和日本药典要求，适合细胞治疗、CAR-T、抗体药、疫苗等药厂的过程控制、放行检测以及临床申报。要用好该试剂盒，除了严格遵循说明书的操作外，还有些注意事项，下面小编向您介绍一下。

一、仪器的设置

要注意你所用的qPCR仪有几个通道，是否可检测相应的荧光素。

MB的支原体qPCR检测试剂盒（英文名：Venor®Gem qEP）适用的荧光定量PCR仪的机型广泛，相关设置可从缔一生物网站下载。

二、基线设置

许多qPCR仪软件有自动基线设置功能。

但要注意，有时也需要查看原始荧光数据，了解各个样本的基线水平。

如下图图1，有一些样本的基线水平较高，就提示这些样本可能存在一定的数据偏差或操作错误。

图1. 基线校正前的曲线

三、阈值设置

许多qPCR仪软件有自动阈值设置功能。但也应关注一下，仪器自动设定的阈值线是否合适。这需要一定的经验。

如果阈值设定太低，会使灵敏度**化，增加假阳性的可能；

如果阈值设定太高，可能会影响灵敏度并导致假阴性。

图2和图3就是一个例子。

图2. ABI 7500自动阈值的设定。

图3. ABI 7500手动阈值的设定（荧光**值的5%）

在图2中，有2个样本为支原体阳性（黄线和红线）。

在图3中，这2个样本中有一个变为阴性了（红线）。

总之，阈值设定，如果是软件自动设置，应再看一下阈值线的位置是否合适。必要时可进行手动设置。