支原体检测方法
理论上,检测细胞或相关培养产品中,是否含有支原体的方法有很多,染色法、培养法、核酸法、ELISA法等,各有其优缺点。
干细胞治疗项目、免疫细胞治疗项目、CAR-T项目、抗体药生产、疫苗生产,另外还有一些重要的细胞培养,例如细胞典藏项目登,都需要对培养的细胞或收获的产物,完成准确的支原体检测,以确保产物没有支原体污染。
一般来说,需要检测方法应具备以下特点:
(1)结果准确
(2)最好还操作简便,出结果快
(3)需要时,还需有方法验证,符合国际或国内《药典》的要求。
因此,综合考虑,核酸法支原体检测,成为更多实验人员的选择。
核酸法检测支原体,推荐使用商品化的检测试剂盒,经过市场考验,结果更稳定。
支原体核酸法
检测试剂盒
以德国MB支原体检测相关产品为例,简述常见的几种检测用试剂盒。
选购时,需要从自身实验需求出发,选择能够实现自己实验目标的产品。总的来说,qPCR法更适合定量实验;常规PCR法更适合只需定性的实验。
一、qPCR经典法试剂盒:
Venor® Gem qEP
①经典法qPCR试剂盒,遵循欧洲药典流程要求
②高特异性,一次检测即可涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种(涵盖欧洲药典规定的9种支原体),根据序列一致性,至少可以检测到107种支原体物种。操作简单,易于观察。
③高灵敏度,MB公司的经典法试剂盒检测限可达到≤10CFU/ml。
④该试剂盒可与绝大多数、能够检测荧光染料 FAM 和 HEX的实时荧光定量 PCR 仪结合使用。
二、常规PCR经典法试剂盒
Venor® Gem Classic
①内控对照为独立包装,遵循欧洲药典和日本药典操作流程。
②高特异性,仅一条阳性对照条带,即可涵盖所有可能感染细胞的支原体物种。操作简单,易于观察。
③高灵敏度。
④欧洲药典要求的26种支原体均可检出。该试剂盒可检测出1种脲原体、7种无胆甾原体和85种支原体,与细胞和真核DNA无交叉反应。
三、常规PCR预分装法试剂盒
Venor® GeM Advance
①内控对照已加在预混液中,无需另外配置,使用便捷。
②高特异性,仅一条阳性对照条带,即可涵盖所有可能感染细胞的支原体物种。操作简单,易于观察。
③高灵敏度。
④欧洲药典要求的26种支原体均可检出。该试剂盒可检测出1种脲原体、7种无胆甾原体和85种支原体。
⑤各类试剂预先包被分装在PCR管中,无需将预混液再进行分装,节约时间,减少污染。
⑥凝胶上样缓冲液和染料已预混在反应缓冲液中。PCR反应结束后,产物可直接上样到琼脂糖凝胶上。简化操作步骤,节约时间。
四、常规PCR一步法试剂盒
Venor® GeM OneStep
①内控对照已加在预混液中,无需另外配置,使用便捷。
②高特异性,仅一条阳性对照条带,即可涵盖所有可能感染细胞的支原体物种。
操作简单,易于观察。
③高灵敏度,1-5拷贝/μl的支原体DNA即可检出。
④欧洲药典要求的26种支原体均可检出。该试剂盒可检测出1种脲原体、7种无胆甾原体和85种支原体。