浅谈qPCR检测中「内参」的意义

实时荧光定量

核酸扩增检测系统

qPCR主要是利用插入性染料或荧光探针，人们可以通过监控PCR过程中的荧光强度比较多个样品的DNA水平。

qPCR本质就是测定样品中某个模板的起始量ct值。但在实际操作过程中，由于之前DNA提等步骤，各个步骤存在不同的效率，在实验过程中也存在加样误差、各孔温度差等影响，每个样本的Ct值并无法真实反映每个样品中初始模版的绝对量，这就使得我们无法对不同处理的样本进行分析评价。因此，我们需要一个参考标准对每一个样本进行校正，排除其他无关因素带来的的影响。

内控(内参，Internal Control)，也就是内部参照测量，也叫内部控制。使用内参的目的是便于在分析过程中，将不同样品的起始量做均一化处理。内参通常选择在不同组织中有稳定表达量或不受实验处理影响的基因，在每个样品中的表达量不发生变化，比如管家基因（house-keeping gene）。以小鼠为例，常用的内参有β-actin、18S rRNA、α-tublin和GAPDH等，有时也可以用基因组DNA做内参。

但需要注意的是，现在也有观点认为，这些基因在不同组织中丰度也不同，例如GAPDH，在线粒体含量高的组织中丰度高。有时候，不同的研究实验需要选择不同的内参。一些文章在发表时，审稿人也会要求使用两个内参加以证实。

MB Venor®Gem qEP，用经典的qPCR方法检测样品中是否含有支原体，其中也会用到内参（内控），可以在对支原体其作用也是对样品做均一化处理，保证实验结果的稳定。

MB Venor®Gem qEP

产品特点：

1.内控对照为独立包装，遵循欧洲药典和日本药典操作流程。

2.高特异性，一次检测即可涵盖所有常见易感染细胞的支原体物种（包括欧洲药典规定的9种支原体）。与细菌和真核DNA无交叉反应。

3.高灵敏度，检测限可达到≤10CFU/ml。

4.相应配套的支原体基因组DNA和细菌基因组DNA，便于特异性验证。

5.有相应配套的支原体定量标准品，便于最后定量检测。