如何高效培养细胞——无菌环境的控制

常见的细胞培养物污染主要分为化学污染与生物污染。

生物污染

细菌污染：

在生物污染中，细菌污染更为常见。特点就是：发生迅速、容易观察。一般发生细菌污染后几天内，就能肉眼观察到；可肉眼观察到培养物变浑浊，有时可观察到明显颗粒物，液体表面可能会形成一层薄膜。

真菌污染：

酵母菌、霉菌是真菌污染中常见的两类。污染初期，培养基pH均不会有明显变化，后期会伴随pH的升高，培养物会变得混浊，显微镜下观察，酵母菌污染会有椭球形或球形颗粒，而霉菌污染则能看到明显菌丝。

支原体污染：

支原体非常小，光学显微镜下难以检测，污染前期也很难看到明显现象。当支原体密度高到一定程度后，会导致细胞培养物“变质"：pH骤变引起培养基快速变黄等。一些生长缓慢的支原体可在培养物中持续存活，而不会导致细胞死亡，但支原体污染的细胞，通常行为和代谢都会发生改变，进而影响实验结果。

病毒污染：

病毒可以利用宿主细胞的结构进行繁殖。体积小，检测及祛除的难度都比较大。虽然大多数病毒对宿主的要求都比较严格，通常不会对宿主以外物种及细胞培养物产生不良影响，但对被病毒感染的细胞本身会产生比较大的威胁。因此，实验时，要选择来源正规的细胞株，实验操作过程中，也要注意无菌操作，预防污染。

细胞交叉污染

不同细胞共同培养在一个培养皿内，就会形成交叉污染。需要通过合格的细胞购买渠道，以及严格规范的操作流程规避该问题。

化学污染

一些外源化学物质，如：用过的器具未清洗干净，使用的添加剂纯度不达标等等。都会对细胞产生或大或小的影响，此类影响可能抑制细胞生长，也可能加速细胞生长，但这些都是不可控的。

因此，在挑选试剂时，要购买在正规产品，尽量使用一次性灭菌器具，注意实验操作规范。

创造无菌培养环境

细胞一旦发生污染，多数情况下都不可再继续使用，即便是使用祛除试剂，也会造成不可避免的经济成本和时间成本。

因此，为细胞创造一个无菌环境就显得尤为重要。对于环境的清洁、消毒、灭菌，以高效、便捷、安全为基本原则。

日常清洁可选用新捷尔灭这类试剂，定期（每周1-2次）对细胞培养室的墙壁、桌面、地面进行喷洒、擦拭处理，同时对细胞培养房间专用的实验服等物品进行清洗、灭菌处理。

除此之外，推荐使用支原体祛除试剂，对实验室环境进行定期维护。

产品特点

（1）快速有效

喷雾剂中含有支原体专用杀除剂Mynox®，可在几分钟内迅速杀除支原体。

（2）广谱抗菌

不仅能祛除支原体，而且能有效祛除葡萄球菌、肠球菌、大肠杆菌、奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、牛腹泻病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠诺如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

（3）无腐蚀性和致癌性

乙醇作为溶剂，无腐蚀性和致癌性成分

（4）操作简便

即用型消毒液，可以快速简单地保持工作区的清洁干净