抗生素在细胞培养中究竟是敌是友？

提到配制细胞培养基，你能想到啥？

营养成分和缓冲体系多数情况下都是必要的，但这抗生素，真的是必要的吗？有了抗生素，细胞就无惧污染了吗？

关于抗生素在细胞培养过程中的意义，一直都有很矛盾，不用细胞容易污染，一直用对细胞状态也会有影响，到底该怎么办？今天我们就来一探究竟。

抗生素对细胞的影响

很多同学养细胞的手艺，都是从师兄师姐那里「传承」来的，由于没有办法做到绝对的无菌，所以从经验角度出发，前辈们都会告诉刚开始养细胞的同学，可以在配制培养基的时候，加入1%左右的双抗，防止细胞出现细菌污染（有些时候甚至出现离开抗生素，细胞没过几天立马就被污染的情况）。

这就造成一些小伙伴在培养基中「预防性添加抗生素」，其实图的就是个心安，抱着「有了抗生素就不怕污染」的心态。但事实上，抗生素并不能一劳永逸，真菌、支原体这些污染是它不能够对抗的，甚至滥用还会适得其反。

这抗生素对细胞有什么影响呢？

早在十几年前，就有很多报导指出β-内酰胺类抗生素及氨基糖甙类抗生素，对真核细胞培养有抑制增殖作用[1]。并且这种抑制增殖作用在原代细胞和干细胞等难养细胞上尤其明显[2-3]。2017年，加州大学Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上发表文章，呼吁在细胞培养过程中减少抗生素的使用[4]。他们发现抗生素（双抗：青霉素和链霉素）的使用影响人体肝细胞中基因表达与基因调控。其中有209个基因的表达发生了改变，特别是与药物和应激反应相关的基因。超过9,500个基因调控元件发生了变化，并且很多调节元件位于参与细胞分化，核酸酶活性和tRNA修饰的基因附近。虽然这些基因的数量在庞大的细胞基因库中不值一提，但这绝对不是一个应该被忽略的事件。

虽然抗生素对真核细胞生长的影响机制至今尚未明确，但是为了细胞更好的生长，实验结果更加准确，实验数据更加稳定，在实验过程中尽量不要随意使用。

参考文献：

[1] KA Neftel, Hubscher, U. Effects of beta-lactam antibiotics on proliferating eucaryotic cells.[J]. Antimicrobial Agents & Chemotherapy, 1987, 31(11):1657-61.

[2] Varghese D S , Parween S , Ardah M T , et al. Effects of Aminoglycoside Antibiotics on Human Embryonic Stem Cell Viability during Differentiation In Vitro[J]. Stem Cells Int, 2017, 2017:1-18.

[3] Nygaard U H , Niehues H , Rikken G , et al. Antibiotics in cell culture: friend or foe? Suppression of keratinocyte growth and differentiation in monolayer cultures and 3D skin models[J]. Experimental Dermatology, 2016, 24(12):964-965.

[4] Ryu A H , Eckalbar W L , Kreimer A , et al. Use antibiotics in cell culture with caution: genome-wide identification of antibiotic-induced changes in gene expression and regulation[J]. Scientific Reports, 2017, 7(1):7533.

如何有效避免污染？

抗生素对细胞有一定伤害，但是不加抗生素又要怎样避免实验出现污染的状况呢？

1、实验环境（包括培养箱内部、冰箱、超净台）要进行定期的消毒，用消毒液（75%乙醇溶液、新洁尔灭等）擦拭地面墙面桌面等地方，不留卫生死角；紫外线照射30分钟以上。

2、定期用支原体祛除试剂清洁超净台台、桌面等地方。

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3、培养箱、水浴锅的水槽要定期清洁，用支原体预防试剂处理。

4、细胞房实验要用专用的实验服：进入细胞房正式实验前须换上专用防护服、专用鞋或鞋套。

5、实验废料不在细胞房堆积，及时清理。

6、遵照细胞实验操作方法，实验过程中严格无菌操作。

另外，选择一款合格的实验试剂也很重要。就拿血清来说，合格的血清产品，一定要有明确的检测报告，指出微生物检测情况。

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