「支原体标准品」质控大揭秘

细胞培养中的

支原体检测

生物制品和细胞治疗企业已越来越多地采用核酸法进行支原体的检查和生产质控。核酸法如替代传统药典方法，则需进行方法验证。

Minerva Biolabs

支原体检测标准品

德国MB公司出品有一系列常见支原体或支原体基因组DNA的标准品，包括灵敏度标准品（10CFU,100CFU）、特异性标准品以及PCR定量标准品，其中灵敏度标准品也可用于耐用性的验证。

MB厂家具有ISO 9001和ISO 13485质量体系认证。每个批次支原体标准品都有验证和质控。同时支原体培养所用的培养基每个批次都符合欧洲药品质量管理局（EDQM）的标准。标准品每个批次都提供有质控证书（COA）。标准品所用的支原体菌株来自英国NCTC菌种保藏中心，同时具有相应的ATCC编号。

MB共有以下三类标准品，在质控方面都做到高标准、严要求。

一、支原体灵敏度标准品

二、支原体特异性标准品

三、PCR定量标准品

一

支原体灵敏度标准品

10CFU/100CFU支原体灵敏度标准品为灭活支原体，用于核酸法的灵敏度和耐用性验证。灵敏度标准品主要在功能检测方面的进行质控：

功能检测：

即标准品复溶后作DNA抽提（采用MB公司的Venor®GeM Sample Preparation Kit），再用符合药典标准的qPCR试剂盒检测，应保证有扩增曲线。

二

支原体特异性标准品

该基因组DNA是从相应的支原体中抽提出来，并制成冻干粉。每管为10ng左右，用于支原体特异性验证实验。

复溶时，每管加配套的Tris缓冲液，室温静置5分钟，再涡旋离心5秒钟。

厂家对基因组中的16S rRNA片段进行了序列分析，要求应与相应支原体物种的同源性应达到99%以上。对制备的DNA质量和数量进行了荧光分析和PCR扩增。PCR扩增应显示为单一的扩增条带。

三

PCR定量标准品

每管为1x10^8拷贝的支原体物种基因组DNA冻干粉，使用时也是先用厂家提供的Tris缓冲液复溶。

质控时，对16S rRNA的部分序列进行测序分析，以鉴定支原体物种，测序结果应显示为99%以上的同源性。再对该标准品作系列梯度稀释，再进行qPCR扩增，应显示为良好的线性。该方法还可确定qPCR方法的检测阈值。

总结

MB公司的上述三类标准品可用于对支原体核酸法的方法学验证，包括灵敏度、特异性和耐用性。其中，基因组DNA除了包括常见支原体物种外，还包括一些常见细菌，用于验证常规PCR或qPCR的检测是否会产生交叉反应。

总之，良好的质控是标准品品质的保证，这样才能确保方法验证结果的可靠性，使支原体的核酸法检测符合药典所规定的标准，从而为替代培养法等经典支原体的检测方法提供数据支持。