大曝光！细胞消化的三个关键点

细胞消化是细胞培养过程中不可少的环节之一。细胞消化操作不当，容易改变细胞状态，引起细胞实验产生不必要的误差，进而影响实验的重复性。

因此，正确合理的细胞消化操作，至关重要。

细胞消化小技巧

细胞润洗次数

绝大部分细胞

用胰酶润洗

一次即可

胰酶是一种蛋白酶，酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽链，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上与培养皿壁结合处蛋白降解，从而使两者分离。这时，细胞由于自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力可成为球形。

由于在细胞培养中，胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。胰酶作用时间过长、作用次数过多，都容易破坏细胞表面结构。

在吸去培养基后，用37℃预热过的PBS润洗细胞表面1-2次，随后加入适量胰酶，以能够平铺在器皿底部一层，略盖过细胞为原则，且润洗一次即可。可放入37℃培养箱中孵育1-2分钟。

何时终止消化

贴壁细胞层

呈流沙状可移动

即可终止消化

有不少细胞培养人员，喜欢把全部细胞，消化成间隔分布很离散的单个圆形的细胞，但实际上，此时的细胞已经处于“消化过度"的状态了。

因此，肉眼观察下，50%左右细胞呈现流沙状，或镜下观察细胞质回缩，细胞之间不再连接成片，即可加入胰酶2-3倍体积的含血清培养基，终止消化。

血清可以终止胰酶对细胞的消化，也为细胞提供*营养。选择一款优质的胎牛血清，为细胞实验提供保障。

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不用胰酶如何消化细胞

EDTA消化

或物理刮涂法

也可使细胞脱壁

只用EDTA，或者用胰酶-EDTA（Trypsin-EDTA）联合作用，也可对细胞进行消化。其中，胰酶切割ECM的一些负责粘连和附着的蛋白，而EDTA通过螯合钙离子，作用于整合素的活性，所以EDTA的作用更加温和。有的人在胰酶中添加EDTA，可以对付特别难消化的细胞。

用细胞刮也可以对贴壁细胞进行物理脱壁。使用时侧拿培养器皿，用无菌细胞刮沿一个方向转动挂，集于底部，直至刮完每一个角落即可。

另外，需要注意的是，在做细胞凋亡检测时，不适合用含有EDTA的胰酶，可以使用物理方法对细胞进行脱壁处理。Annexin V常用于细胞凋亡检测，是一种钙离子依赖的蛋白，EDTA会螯合钙离子从而影响Annexin V，进而影响结果，因此需选用不含EDTA的胰酶。

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