为何血清使用效果千差万别？

「刚买来的细胞，前几代养着还行，这越养怎么状态越差？后面的实验可怎么办？」

经常「饲养」细胞的小伙伴，应该都遇到或听说过上述这些情况。影响细胞状态的潜在因素有很多，血清就是其中之一。

血清对于细胞实验的重要性毋庸置疑：提供细胞生长增殖所需的营养物质、提供结合蛋白、帮助细胞贴壁、提供蛋白酶抑制剂、调节培养体系理化特性等等功能。因此，可以这样认为：血清品质的优劣，一定程度上决定了细胞生长状态的好坏。

很多从业者在挑选血清的时候，只关注到品牌、产地，甚至会哪家打折买哪家，忽略了血清的检测指标、批次以及解冻储存情况。那么，这些细节究竟有何玄ji？本期内容，我们将目光锁定在这三个方面，揭秘其在细胞培养过程中，导致血清使用效果出现差异的原因，希望可以给各位从事细胞培养相关工作的小伙伴，提供帮助！

一、检测指标

血清对于细胞培养很重要，要保证血清质量，需要有严格的质控，包括从外观到理化性质、细胞增殖试验和微生物检查，制定一系列的标准，以及出厂产品能符合这些标准。

以胎牛血清为例，优质的特级胎牛血清，外观应是淡棕色至橙色透明液体，无颗粒物沉淀；PH 在 6.7-8.2 之间；渗透压在 260-340mosm/kg 之间；血红蛋白含量小于 20 mg/dL；总蛋白含量在 30-50 g/L；白蛋白含量在 14-34 g/L；α、β、γ 球蛋白含量则以实际测量为准；IgG 应小于 250 μg/mL；内毒素含量应小于 10EU/mL。

这些指标直接关系到所培养细胞质量的高低。其中的典型代表就是内毒素。健康的胎牛血本身是不含有内毒素的，但是由于采集过程，运输环境，生产工艺等多种因素，商业化的成品胎牛血清不可避免地会检出内毒素。我们都知道，内毒素参与细胞的衰老、凋亡等进程。长期用内毒素含量高的血清培养细胞，更容易影响细胞正常的生理生化功能，令细胞不知不觉进入「亚健康」的状态。细胞健康，实验结果才能更准确；细胞「萎靡不振」，实验结果也容易随之产生偏差。

因此，在挑选血清、查看检测报告的时候，应重点关注内毒素这一项，选择内毒素含量低的血清。以 Ausbian 特级胎牛血清为例：经过检测，其内毒素含量稳定小于 3EU/mL，一些批次甚至小于 1.0 EU/mL！「饮食干净」，细胞状态更健康！

二、血清批次

每年全球产的胎牛血清的总量是有限的。正常情况下，胎牛血清是通过剖腹产 5-8 月龄的牛胚胎，采用心脏穿刺采血的方式，经一系列加工处理后得到的。一次采血最多也就 1 到 2 瓶胎牛血清，所以它本身就要比其他血清更为稀少珍贵。

再大的血清制造商，每一批的血清产量都是有限的。不同饲养条件下、不同品种，相同流水线上操作的不同员工，都会导致同一品牌不同批次的血清略有差别。不同批号的血清在同一个实验中混用，很难保证细胞不会因为「饮食」改变而耍耍实验数据不稳定这样的「小脾气」。

那么，该怎样解决这一难题？每次换血清都从头验证？还是和之前的血清混合使用？最行之有效的方法，就挑选一个安全可靠、货源充足、产品可溯源的品牌！

Ausbian 特级胎牛血清，近二十年服务过千万细胞培养用户，澳洲血源，供货稳定，每个批次产量 800-2000 升，保证大多数项目两年不需换批次。不仅如此，Ausbian 特级胎牛血清可提供多批次平行供应，会根据用户的不同需求，挑选符合实验需求的血清，尽可能减少血清因批次不同而产生的实验误差。

三、血清的解冻与储存

刚到货的血清应该怎样储存？血清到底要怎样解冻才能保证活性？血清在 4℃ 冰箱能放多久？这些细节也会影响血清的使用效果。

常规储存

首先，刚到货的血清，趁着它还未融化，赶紧放进-20℃ 冰箱中，避免反复冻融。当然，如果你的课题组不差钱，-80℃ 冰箱空间充足，把血清储存进去也是没有问题的。

再来说说血清的解冻。很多从业者都习惯将血清从-20℃/-80℃ 取出后，直接丢在 4℃ 冰箱甚至是室温环境下过夜解冻。这种方法虽然看似方便省心，实则有一定的潜在风险。

科学解冻

我们都知道，在血清这种混合物中，融化速度：蛋白质等干物质 > 水这类溶剂，所以蛋白质会率xian溶解析出，而水还是结成冰的状态，导致瓶子中间会出现一根透明的冰柱，而周围则会呈现上黄下红的分层浑浊液的状态，在使用过程中很容易引起沉淀、混合不均匀、局部浓度过高等问题，影响细胞生长。

更重要的一点是，血清中珍贵的生长因子等活性物质，它们在解冻过程中，有着与细胞复苏类似的经历，都需要快速解冻才能尽可能保留生物活性。显然，4℃ 过夜这样的长时间处理，很有可能会导致一部分「营养成分」的损失，影响细胞生长。

所以，为了更好地保留血清中的活性成分，使细胞培养更稳定，我们推荐使用三步法溶解。如果是储存在-80℃ 的血清，则需提前几天先转移至-20℃ 冰箱中（至少 24 小时），再使用三步法溶解，避免温差过大使血清失活。

需要特别提醒的是，此方法国际通用，适用于所有培养基，在水浴过程中，血清的平面要浸在水中。在融化过程中要慢慢摇动瓶身，使血清混匀，但摇动中尽量不要产生泡沫！

解冻血清后，可以根据实验需求，将其分装，保证每一份够一次使用量即可，比如：25 ml/管、50 ml/管等。密封好后赶紧放回-20℃ 冰箱继续储存。需要配制培养基的时候，再从-20℃ 冰箱中取出一管来解冻使用（最好能全部配成培养基，不要有剩余），可以有效避免反复冻融的问题（遵循现用现配、现配现解冻的原则）。配好的培养基可以放到 4℃ 冰箱进行储存。

4℃ 存放时间

看到这里，问题又来了，配好的培养基，或者剩下的那一点点血清，能在 4℃ 冰箱里放多久呢？先给出我们认为比较合理的答案，再来解释原因：7 天

一般情况下，已经解冻的血清，无论是配成完quan培养基还是在冰箱里备用，都不要超过一周（7 天），原因也很简单，存放太久，生长因子等物质容易失活，而且比较容易受到污染，影响实验结果。

其实，无论是日常使用，还是销售运输过程中，血清都忌讳反复冻融，不仅容易析出沉淀，造成细胞污染的假象，给实验人员造成比不要的困扰，而且在一些对营养需求比较特殊的细胞而言，反复冻融析出大量沉淀的血清，可能不足以供给其营养，导致细胞出现生长不良等状况。

因此，选择一款运输途中储存条件有保障的血清，至关重要。Ausbian 特级胎牛血清及其同系列血清产品，出厂后，全程冷链运输，对反复冻融 Say No！

综上所述，想要保证细胞状态、实验数据的稳定，一款优质的血清不可少。Ausbian 特级胎牛血清就是这样一个令人安心的选择。

在血源的控制上十分严格：Ausbian 特级胎牛血清为澳洲血源，优中选优，精选当地政府兽医部门的监督下从注册的出口屠场采集，符合国际动物协会要求，并且严格控制采血时间为 5-8 月龄的牛胚胎，尽可能保留各类生长因子，并且避免了完整的补体系统对细胞的影响，无需热灭活，出厂后全程冷链运输，避免反复冻融！

在生产工艺、质量检测、批次控制上严格把关，做到保证同一批次血清产量充足的同时，质量上基本无差异：将经过初步检测合格的很多供体胎牛的粗血清，混合在一起，在低温条件下，经七次加压过滤，最后三次为 0.1 µm 无菌过滤处理，再经后续的一系列无菌操作，最终得到优质的 Ausbian 特级胎牛血清。所有血清出厂前，均经过严格质控，每个批次附有详细完整的《检测报告》。针对特殊科研项目，更可提供 3-5 个平行批次，让实验者有更多选择空间。

Ausbian 特级胎牛血清，内毒素更低，让细胞在健康的环境中生长：精选内毒素更低批次，内毒素 ≤ 3EU/mL，有些甚至低于 1EU/mL，深受众多科研用户的喜爱，也是是细胞典藏等重大项目十几年的稳定供应品牌。

除了上述产品优势，更有安心的售前售后服务提供给各位 Ausbian 用户：贴心的试用服务，试用满意的批号可以优先锁定；每年按厂家生产顺序，会有多批次平行供应，每个实验室专属批号；为 Ausbian 血清用户免费提供申报支持，具有完整的检测报告，为各类项目的申报提供支持；为 Ausbian 血清提供免费代储存服务，按要求随时发货；所有实验室签收的 Ausbian 胎牛血清，从签收日开始计算，一年之内，血清在妥善保管、未开封未融化、且不影响二次销售的情况下，均可享受无条件退货或换货的售后保障；免费专业帮助，汇集近二十年，千万个血清用户细胞培养经验，为各种细胞培养提供问题梳理分析，解决方案参考。Ausbian 品牌拥有全系列血清产品线：特级胎牛血清、细胞治疗专用胎牛血清、透析胎牛血清、马血清等多系列产品，服务更专业更精准。