“ 科研中，如何快速检测SARS-CoV-2？“

　　一、产品用途：

　　新guan病毒RT-qPCR引物/探针(套装)(英文名：SARS-CoV-2 Confirm)，用于定性检测和分析新guan病毒RNA。它仅用于研究，不用于临床诊断。

　　品名货号/规格存储

　　新guan病毒RT-qPCR引物/探针(套装)

　　英文名：SARS-CoV-2 Confirm

　　品牌：德国MB公司(Minerva Biolabs)271-2100

　　100个反应/盒2-8℃避光。

　　冻干粉复溶后在-18℃以下保存

　　二、产品描述：

　　1. 该产品包括三个小管：

　　①橙盖： 2019-n CoV Mix(冻干粉)，1管。

　　此管为新guan病毒引物/探针，可特异性扩增新guan病毒的RdRp基因(即RNA依赖性RNA聚合酶基因)，而其他冠状病毒RNA不会被检测到【1】【2】。(该引物/探针依据WHO诊断参考实验室公布的新guan病毒引物/探针序 列而设计【1】。更多详情可访问：

　　如要检测其他冠状病毒，推荐MB公司提供的其他冠状病毒引物/探针，品名：CoV Screen (without ConviFlex™RT-Taq Mix)，货号：271-1100。

　　②绿盖：Positive Control RNA(阳性对照RNA，冻干粉)，1管。

　　此阳性对照RNA为一段合成的RNA序列(序列来自武汉的病毒株)。

　　③白盖：PCR Grade Water(液体)，1管。

　　2.使用前，①橙盖和②绿盖先用PCR级水(③白盖)复溶，并分装，避免反复冻融。

　　3.该引物/探针应与MB公司提供的【RNA病毒检测试剂盒】(英文名：ConviFlex™RT-Taq Mix,货号192-0025/-0100/-0250)一起使用，用于新guan病毒RT-qPCR反应检测。

　　4.检测样本需为抽提过的RNA样本。

　　5.新guan病毒的靶基因RdRp是用FAM™通道检测，扩增的人RNA酶P基因(过程对照)用ROX™通道检测，用以评估样本的制备质量。

　　三、产品特点：

　　1. 靶点特别。依据WHO国际标准，此引物探针为新guan病毒RdRp基因，而非市面上常见的ORF1ab和N基因或E基因。

　　2.阳性对照RNA为一段合成的RNA序列。

　　3. 主要组分为冻干粉，4℃保存，储存运输方便，性能稳定。

　　4. 适用于科研中，各种来源的RNA样本，包括拭子、活检组织、哺乳动物细胞和细菌等。

　　四、需用户自己准备的试剂耗材和仪器：

　　1. RNA病毒检测试剂盒(RT-qPCR法)(英文名：ConviFlex™ RT-Taq Mix，货号192-0025/-0100/-0250)

　　2. 荧光定量PCR仪(qPCR仪)

　　3. 无DNase和RNase的qPCR反应管

　　4. 离心机

　　5. 移液器及带滤芯吸头(不含DNase和RNase)

　　6. 用户自己提取的RNA或现成的RNA样品。(抽提过程建议使用商品化的RNA提取试剂盒完成，如MB厂家的：【病毒RNA提取试剂盒】(ExtractNow™ Virus RNA Kit，货号611-1010/-1050/-1250)或【病毒RNA拭子提取试剂盒】(ExtractNow™ Virus RNA Swab Kit，货号611-2250)。

　　五、操作注意事项：

　　1. 该引物/探针应仅由经过培训的实验室人员使用。

　　2. 始终穿上合适的防护服和戴一次性手套。

　　3. 根据样品类型，应谨慎处理所有样品。

　　4. 请遵循WHO推荐的方法处理样本。

　　5. 该试剂盒不含有害物质。残余物可以根据当地法规丢弃。

　　六、操作步骤：

　　步骤1. 试剂制备：包括试剂溶解等预处理步骤

　　步骤2. RT-qPCR引物/探针mix制备

　　步骤3. 设置qPCR程序

　　步骤4. 启动程序

　　步骤5. 数据解读

　　FAM™ 通道ROX™ 通道 说明

　　阳性阳性检测到SARS-CoV-2 RNA

　　阳性阴性检测到SARS-CoV-2 RNA

　　阴性阳性未检测到SARS-CoV-2 RNA

　　阴性阴性结果无效

　　七、使用注意事项：

　　1. 使用前应认真阅读说明书。

　　2. 来自不同批次的试剂不能混合。

　　3. 试剂盒内的试剂应始终作为一个整体溶解分装。

　　4. 试剂盒应在效期内使用。

　　5. 每次PCR至少应设置一个阳性对照。每次PCR至少应设置一个阴性对照和/或一个无模板对照。

　　6. 建议在无RNA和DNA污染的条件下进行RT-PCR，以避免操作过程中DNA或非特异RNA的交叉污染。(MB公司推荐使用PCR污染祛除喷雾，英文名：PCR Clean™，货号15-2025，预先清洁实验环境。)

　　7. 尽量减少RNA样品的冻融次数，同时避免RNA酶污染，以减少RNA降解的风险。(RNA降解会极大地限制了RT-qPCR反应的性能)。请确保高质量的完整RNA用于检测。

　　8. 样本制备过程中，注意避免其他DNA的污染，DNA的干扰也会降低qPCR的准确性。