支原体PCR绝对定量标准品的说明及复溶操作

　　支原体PCR绝对定量标准品对支原体PCR或qPCR方法进行验证，除了可参考试剂盒生产厂家自身的验证外（尽管它不能*替代用户自己的验证，但可提供特异性验证的一些信息，如使用哺乳动物细胞DNA、某些细菌菌属DNA等，而不必使用者自己再去尝试），用户自己主要是对方法的检测限和耐用性进行验证，这里常用的就是10CFU支原体标准品。100CFU标准品可作为一个补充。

　　支原体PCR绝对定量标准品的说明：

　　1.定量标准品dna包括支原体基因组dna和细菌基因组dna，用于梯度稀释后，qpcr标准曲线的绘制。

　　2.支原体基因组dna用于支原体核酸扩增检测的方法学验证，包括确定支原体qpcr方法的检测限。

　　3.细菌定量标准品dna用于qpcr检测水中细菌的精确定量。

　　复溶操作：

　　1.标准品短时离心，以收集冻干粉至管底。

　　2.取试剂盒提供的tris缓冲液（白盖）100µl，加入到标准品管内（绿盖）。

　　3.室温下静置5分钟。

　　4.涡旋混合10秒钟，离心5秒钟。

　　5.选合适体积的复溶dna用于pcr扩增或梯度稀释，以制备标准曲线。

　　支原体PCR绝对定量标准品每批支原体都会提供CFU与基因拷贝数的比值，以方便二者的换算。因为10CFU只能确定PCR能够达到的检测限在10CFU以下，但无法具体确定灵敏度的数值。带DNA拷贝数标定的基因组DNA标准品则可进一步确定检测限的数值。而且核酸法最终检测的对象是核酸，而产品的QC主要关注的是支原体，核酸的存在是侧面反映支原体存在的一个指标。CFU与基因拷贝数的比值很好地对二者进行了关联。