细胞污染支原体,是令细胞培养相关从业者十分头疼的问题。细胞感染了支原体又不愿丢弃怎么办?本系列内容分情况为大家解答。
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普通细胞支原体祛除
适用范围
对于费力扩增的细胞(如已转染,或经过体外刺激),如果细胞中发现有支原体污染,但此细胞又不愿丢弃,希望继续培养,推荐使用MB公司生产的复合抗生素Zell Shield®。
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Zell Shield®特点
·特点
高效广谱:Zell Shield®通过阻止支原体、真菌、霉菌、致命病菌增殖过程中DNA及蛋白的合成,有效抑制上述微生物的增殖。
安全:无细胞毒性,采用复合支原体敏感抗生素,对大多数细胞株无毒。
活性稳定:在细胞培养期间,Zell Shield®始终保持稳定的活性。
使用方便:Zell Shield®为无菌溶液,可直接加入培养基使用。
03
Zell Shield®使用方法
使用方法
(1)在每次使用Zell Shield®之前,细胞传代时,先使用厂家推荐的“悬浮冲洗法”处理好细胞,再使用加了Zell Shield®的培养基养细胞,能达到*佳的祛除支原体的效果。
(2)Zell Shield®常规为-18℃保存,建议使用前,先融化分装,仍旧-18℃避光保存,使用时按需融化配置。避免反复冻融。
(3)Zell Shield®按1:100浓度可直接加入培养基。例如:500ml培养基中添加5ml Zell Shield®,50mL/瓶的Zell Shield®可供5L培养基使用。
什么是悬浮冲洗法
据研究表明,约98%的支原体存在于细胞表面和细胞间隙。细胞传代时,用干净的PBS反复悬浮冲洗,就能把70%以上的支原体冲下来。
支原体直径在180~350nm之间,远远小于细胞直径。通过低速离心,很容易将细胞和支原体分离,弃上清即可祛除大部分支原体。
简要步骤
消化细胞
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离心
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弃上清
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PBS清洗细胞
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低速离心弃上清
重复清洗3次
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加入含有Zell Shield®的