贴壁型的细胞的汇合度约为100%的时候,需进行传代操作。
当细胞以克隆的形式生长时,汇合度则达不到100%。对于该类型的细胞,达到或者接近最大密度的时候,即观察不到细胞明显扩增时,就需要进行传代。
接触抑制型细胞需要在细胞长满之前传代,避免产生细胞长满后接触抑制后产生性状的改变。
悬浮型的细胞必须在细胞达到最大饱和密度之前传代,悬浮细胞传代时只需稀释至合适的密度,让细胞有充足的营养恢复到对数生长期。
如何处理肿瘤细胞株?
了解每株细胞可能产生的生物危害是很难的。
强烈推荐,所有的人类和其他灵长类生物的细胞在预防HIV和肝炎病毒的实验条件下操作;
所有的操作必须在生物安全柜中操作,遵守生物安全柜使用规范;
操作过程中产生的废液和废仪器都要经过清洗、酸处理等处理后才能丢弃。
WHO公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求:
1、牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家,并应具备适当的监测系统。
2、有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。
3、证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。
4、血清要通过滤膜过滤除菌,保证无菌。
5、无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染,有些国家要求无细菌噬菌体污染。
6、对细胞有良好的支持繁殖作用。
我国对牛血清的质量中提出比较严格的标准要求:
包括蛋白质含量,细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素,支持细胞增殖检查。一款来自澳洲的Ausbian®胎牛血清在市场上颇受欢迎。它具有精选内毒素极低、产量充足的血清批次,满足干细胞、基因敲除、原代培养、细胞典藏、长期传代等各类细胞的培养要求;澳洲血源,完整的检测报告及灭病毒服务,为各类临床相关项目的申报提供完整支持等特点。