一招教你如何远离支原体污染

在疫苗生产、生物制药，细胞免疫，Car-T，以及基础科研过程中的细胞培养试验，支原体污染的预防和祛除，是保证生产质量和实验顺利的重要环节。

往期文章，已经为大家介绍了『支原体检测』的常规方法，其中包括荧光定量PCR方法的检测试剂盒，以及可做方法学验证的标准品等。

本期文章，我们将进一步、多角度的介绍『支原体祛除和预防』的常见简便方法，希望对疫苗生产、生物制药、细胞学研究等项目的质检质控有所帮助。

关于整个细胞培养过程中支原体祛除与预防，我们将从以下三个方面展开：

一、工作区域中支原体祛除与预防

支原体可以说是“无处不在"，稍有不慎，环境中那些对细胞有害的支原体，很容易污染培养体系。

因此，应将支原体的清除与预防，日常实验室工作区域的清洁、维护过程中。

除了正确穿戴实验防护用具外（如：口罩、细胞培养室专用实验服、鞋套等），还应定期*清洁工作区域：用新捷尔灭等稀释液进行墙面、地面的喷洒和擦拭。对于桌面、实验台面以及摆放了仪器设备的地方，应选用针对性更强的支原体祛除预防试剂。

Minerva Biolabs Mycoplasma-off™就是一个不错的选择。该喷雾剂/湿巾中含有支原体专用杀除剂Mynox®，可在几分钟内迅速杀除支原体，而且对葡萄球菌、肠球菌、大肠杆菌、奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、牛腹泻病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠诺如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等微生物也有比较好的清除效果。

Mycoplasma-off™安全性高，没有腐蚀性和致癌性成分，相比起其他消毒成分，将人体和实验仪器设备的消毒风险降至更低。

即用型消毒液，可以快速简单地保持工作区的清洁干净。

二、细胞培养体系中支原体祛除与预防

在进行细胞培养实验时，如果发现细胞生长缓慢、甚至大量漂浮、细胞培养液提前变黄等情况，请务必警惕，有可能就是中了支原体的招。

对于珍贵的细胞株，我们往往希望可以拯救一下，首先可以用PCR/qPCR方法检测细胞是否被支原体污染。

如细胞株已发生污染，采取以下三种方法处理，能在尽可能短的时间，高效祛除支原体，并有一定的预防能力：

1、Zell Shield®支原体祛除剂（培养基用）

适用范围

• 细胞已发生支原体污染，但又不愿丢弃，希望继续培养（如已转染或大量扩增的细胞）。

• 初始培养的原代细胞。

• 存在支原体污染高风险的细胞。

用法

• 1:100加入培养基。

• 当细胞存在支原体污染时，应先对细胞悬浮冲洗三次，再用含Zell Shield®培养基培养。每次传代前都应做悬浮冲洗处理。连续传代4次，支原体即可祛除。

2、Mynox® Gold支原体祛除剂（珍贵细胞保种用）

适用范围

被支原体污染的珍贵细胞或不易获得的生物样本（如细胞种子）。

用法

• 将「首CI治疗液」加入到4.5ml培养基（FBS需≤5%）中，培养细胞（细胞数为104~105）。

• 细胞长至80%-90%汇合时，细胞传代。将1管「巩固防护液」加到9.5ml培养基中，用该培养基继续培养。

• 重复步骤2，细胞再传代2次，支原体即*祛除。

注意：每次传代时，最好都能把细胞悬浮冲洗三次，可取得更好的治疗效果。

3、Mynox®支原体祛除剂（珍贵样本用）

适用范围

被支原体污染的珍贵细胞、不易获得的生物样本或病毒收获液（特别是不能长期培养的样品）。

用法

对于贴壁细胞：

• 培养皿中加入200μl Mynox®和 2.8ml培养基中（FBS≤5%），混匀。

• 再加入2ml细胞（细胞数为10^4~10^5，培养基中的FBS需≤5%）。

• 细胞培养2小时，弃上清，换用新鲜培养基培养4代即可。

对于悬浮细胞：

• 在离心管中加入200μl Mynox®和1.6ml胰酶（0.125 %，5 mM EDTA in PBS），混匀。

• 加入1.6ml细胞（细胞数为10^4~10^5）。

• 室温静置30min。

• 低速离心5min。弃上清，换用新鲜培养基培养4代即可。

三、水浴锅、水箱等支原体祛除与预防

水浴锅、细胞培养箱中的水槽，也容易变为各类污染滋生的温床。保持水槽的洁净，对细胞培养的顺利进行非常重要。因此在进行清洁时，不要忘记水浴锅、水槽等地方。

这里推荐大家使用支原体祛除剂（水槽用）——Water Shield™。

Water Shield™可持续作用4周，使水源避免受到支原体、细菌、真菌、霉菌、孢子的污染。且不含醛类或叠氮化物，对细胞无毒害。

使用起来也十分便捷，Water Shield™与无菌水按1:200比例，直接加入水中，使用方便，使用后不产生水垢