细胞培养过程中的血清沉淀
在日常实验过程中,一些同学或多或少都会遇到血清出现沉淀的情况。那么问题来了:
血清中的沉淀是什么?
这些沉淀是如何产生的?
沉淀对细胞培养会造成影响吗?
如何减少血清沉淀?
如果你也关心这些问题,那就跟着我们一起,来到今天的血清科普小课堂吧,帮你一篇理清血清沉淀的各种问题!
细胞培养中
血清沉淀从何而来?
一般来说,血清沉淀的成分可以简单分为以下几种:
1、纤维蛋白:常见的体积比较大的沉淀物,达 1-2mm,肉眼可见。因为一些血清在收集和快速处理过程中,存在纤维蛋白原(可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体),处于溶解状态,但经过滤分装后,就会在瓶中凝结出现纤维蛋白的沉淀。
2、磷酸钙:会使血清出现浑浊的一种沉淀物,并且在 37℃ 培养时出现增加。这类沉淀物镜下观察是一个小黑点,由于布朗运动,它们看上去仿佛可以运动,因此常被误认为是微生物污染。
3、胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质:也是血清中出现沉淀物的常见原因。
细胞培养中
血清沉淀有何影响?
血清沉淀会影响细胞生长吗?
一般情况下,沉淀物不会影响细胞培养,但如果细胞对于营养物质有特殊需求,沉淀物中的成分不能被细胞吸收,可能会引起细胞长势较差。
血清沉淀会影响细胞实验吗?
会影响血清过滤。一些特殊实验中,需要对细胞培养基进行过滤,如果血清中出现大量的沉淀物,混入培养基中,会导致过滤孔被堵塞,影响过滤效果。
血清沉淀导致细胞污染吗?
一般情况下,正常的沉淀物不会导致细胞污染。
但多数情况下,血清沉淀会对我们判断细胞是否出现污染造成困扰。
絮状沉淀容易和真菌、细菌混淆;磷酸钙沉淀引起的小黑点容易与支原体污染混淆。
细胞培养中
血清沉淀从何而来?
刚出厂的血清,应该是澄清透明的,为了保证品质,血清会储存在-20℃的环境中。如果运输过程中,出现了温度忽高忽低,反复冻融的情况,就容易析出大量沉淀。
另外,不正确的解冻方法也会引起血清产生大量沉淀。
细胞培养中
如何减少血清沉淀?
1、正确的运输温度:运输过程中,要严格-20℃低温,避免反复冻融。
2、使用正确的融化方法:在使用时,正确的解冻方法也很重要,这里推荐使用国际上通用的“三步法”解冻。
需要注意的是,如果血清是储存在-80℃冰箱中,正式解冻前应先转移至-20℃冰箱中过渡。
一次解冻后,分装至无菌离心管中,尽量保证每管是一次的用量,分装管解冻也遵循三步法,解冻后需全部用完。
3、使用正确的储存方式:长期储存在 2-8℃或在室温下放置时间过长,都会引起沉淀,建议配制好的*培养基在4℃冰箱中存放不要超过7天,血清分装好后-20℃储存。
4、特殊的处理:γ射线照射与热灭活也容易引起沉淀析出,因此要注意射线照射剂量以及热灭活方法(40℃水浴加热20分钟即可)。
细胞培养中
如何去除沉淀?
如果要除去血清中的沉淀,可以将血清分装至无菌离心管中,大约400g 离心,留上清即可。由于滤膜容易被沉淀堵塞,因此不建议用过滤的方法。
血清品质
沉淀不是检验血清的硬指标,但为了实验准确、实验美观、实验便利,还是应该尽量减少沉淀的产生。掌握正确的血清解冻、使用方法,再加上一款品质稳定的优秀血清,对于细胞实验来说,至关重要。
正确的使用方法与优质的血清,二者缺一不可。
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