关于血清质量的鉴定

血清的质量标准:血清质量高低取决于两方面因素：一是取材对象，二是取材过程。用于取材的动物应健康无病并且在指ding的出生天数之内，取材过程应严格按照操作规程执行，制备出的血清要经过严格的质量鉴定。WHO公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求：

牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。并应具备适当的监测系统。

有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。

证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。

血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。

无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些国家要求无细菌噬菌体污染。

对细胞有良好的支持繁殖作用。

我国在对牛血清的质量2000年版《中国生物制品主要原辅料质控标准》中提出比较严格的标准要求。包括蛋白质含量，细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素，支持细胞增殖检查。

血清质量的鉴定一般包括以下几个方面：

理化性质：如渗透压、pH值、蛋白电泳图谱、蛋白含量、激素水平、内毒素等。蛋白含量包括血清总蛋白含量（不低于35-45g/L）、球蛋白含量（应小于20g/L)、血红蛋白含量等。其中球蛋白含量是一项非常重要的指标，血清中球蛋白主要是抗体，球蛋白含量越低血清质量越高。血红蛋白也是越低越好。

微生物检测：包括细菌、真菌、支原体、病毒等。特别是对支原体、病毒的检测，支原体是一种很小的微生物，可通过孔径22u的滤膜。支原体、病毒污染在光学显微镜下难于察觉，细胞也能生长繁殖，但会影响实验结果。检测支原体的方法很多，如培养法、PCR法、荧光染色法、电镜观察法等。

促生长效果：这是血清重要的特性之一，应当以培养的细胞来检测。有两种方法：克隆形成率、贴瓶率测定法和连续传代培养法。

(1)克隆形成率测定：一般以悬浮生长的细胞为培养对象，按有限稀释法做克隆化培养，将不同批号的血清配制成不同浓度的培养基，细胞也稀释成不同浓度，接种到96孔板，每孔200ul，培养一定时间，统计有克隆生长的孔，计算出百分比，再与对照的标准血清相比较，就可看出不同批号血清间的区别。比较低的浓度，更能观察出血清质量间的细微差别。

(2)贴瓶率测定：是以贴壁细胞为培养对象，将细胞稀释至低密度，接种至平皿，每皿200或100个细胞，以不同浓度的血清培养基培养，培养一定时间后弃培养基，染色后统计集落数，计算出集落数占接种细胞数的百分比，同样再与标准血清比较，判断血清质量高低。

(3)连续传代培养法：是将细胞培养于3个一定体积的培养瓶中，待测血清配制为5％浓度，一般于第七天收集细胞，计数，取平均值，中间可以更换一次培养基。连续测试三个周期以上，观察细胞生长状况，并将每次的计数结果与标准血清的测试结果比较。

对于使用者，判断血清质量先从外观入手。好的血清应该是透明清亮，土黄色或棕黄色，无沉淀或极少沉淀，比较粘稠。如发现血清浑浊、不透明、含许多沉淀物，说明血清污染或血清中的蛋白质变性；若血清呈棕红色，说明血清中的血红蛋白含量太高，取材时有溶血现象；如果摇晃时感觉液体稀薄，说明血清中掺入的生理盐水太多。如果要进一步了解血清的质量，则应连续培养某些细胞，观察细胞生长状况。

科研实验中，细胞的体外培养一直是一个重要环节。细胞要养好，就要用好血清，如Ausbian®特级胎牛血清，它适合各种细胞培养，尤其适合难养细胞，如：干细胞、肝细胞，神经细胞，原代培养、细胞融合、转染细胞等。

Ausbian®特级胎牛血清所有血清出厂前，均经过严格质控，每个批次附有详细完整的《检测报告》，包括：品名，货号，批号，血源地，生产日期，保质期，pH值、渗透压、血红蛋白、总蛋白、球蛋白、IgG、内毒素、无菌检查（细菌、真菌、支原体）、病毒检查（如BVD、牛腺病毒、细胞病变效应等）、促细胞生长能力、细胞毒性、BVD-1/2抗体检查等。

实验人对于新批次血清，应认真审阅《检测报告》，做好试用前筛选第一步。（如何看懂《检测报告》，可登陆“缔一生物"网站，留言技术部，得到免费帮助。）

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