今天我们书接上回,接着讲讲另外3个关键点。
公共设备可能存在问题
仪器的参数
也会影响细胞状态
如果细胞不存在污染,培养体系没有瑕疵、细胞初始状态也没有问题,那么可以考虑公共仪器设备是否存在纰漏。
常见有水浴锅温度、室内温度及湿度、培养箱参数、水浴锅温度等。
水浴锅是细胞培养室常用的仪器,要定期用温度计对其工作温度进行检查,观察是否存在温度不准、温度骤变的情况。另外要强调一点,水浴锅也是常见的污染源之一,水浴锅中的水最好使用无菌水,并定期做好清洁工作,推荐大家使用MB WaterShield,可以有效清除、预防水槽中的支原体,方便安全、省时省力省心。
细胞实验室的温度及湿度:仪器还是操作对温度没有特殊要求,维持舒适的温度即可,比如18~26℃;过高的湿度会导致微生物的滋生,所以建议正常维持湿度在70%以下。应定期用温度湿度测试仪对细胞实验室进行检测,以防温控系统出现故障。
培养箱参数:一般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37~38℃;大多数细胞适宜的pH范围往往是7.2~7.4。在开放式培养中,以5%的二氧化碳气体比例为宜。但在实际操作过程中,细胞培养箱有可能会出现以下故障,影响细胞培养体系,进而使细胞生长变得缓慢:
温度和温度设定不准;
细胞培养箱湿度不能维持;
细胞培养箱的二氧化碳浓度不准。
对应解决方法给大家整理好,建议大家保存,以备不时之需。
实验人员可能发生变化
细胞“饲养员”的更换
也可能影响细胞生长速率
作为一名合格的细胞“饲养员”,一定要预先了解所养细胞的“习性”:用哪种培养法、使用何种类型培养体系(血清种类、基础培养基类型、是否添加生长因子以及抗生素等),尽可能还原初始的培养环境,让细胞有个适应的过程。另外,实验者自身也要注意操作规范,按照标准流程培养。
实验试剂可能发生改变
培养用的试剂
也可能会是影响因素
不同品牌的试剂可能会有些许差别,对于一些比较娇贵的的细胞,这些细微的差别很可能会导致细胞生长受到影响。因此我们一直强调大家“追本溯源”,尽可能用与原来一致的培养条件。
如果要更换试剂,建议大家先做个对照试验,看看新的试剂对细胞生长有没有影响。
另外,除了以上这六点,还有一点需要特别注意,就是:
细胞的代次
一般来说,细胞传代次数是一定的(一些癌细胞系属于特例),特别是像间充质干细胞这类对代次比较敏感的细胞,需要格外注意,传代次数过高后(10-15代左右),细胞生长速率也会明显减慢。在实验时,尽量选择代次较低且状态稳定的细胞。