我们对培养细胞时用到的牛血清有什么要求？

细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

牛血清的质量要求

（一）WHO公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求

1. 牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家，并应具备适当的监测系统。

2.有些国家还要求牛血清来自没有用过反刍动物蛋白饲料喂养的牛群。

3.要能证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。

4.血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。

5.无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些国家要求无大肠杆菌噬菌体污染。

6.要求血清对细胞有良好的支持繁殖作用。

我国在对牛血清的质量标准最早在2000年版《中国生物制品主要原辅材料质控标准》中提出。包括物理性状、总蛋白，血红蛋白、细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素，支持细胞增殖检查。2005版药典颁布之后，小牛血清质量标准被纳入《中国药典》2005年版 第三部 生物制品分册。

科研实验中，细胞的体外培养一直是一个重要环节。细胞要养好，就要用好血清，如Ausbian®特级胎牛血清，它适合各种细胞培养，尤其适合难养细胞，如：干细胞、肝细胞，神经细胞，原代培养、细胞融合、转染细胞等。

有下列情况者，对血清内毒素应格外留意筛选：

1.养干细胞时，干细胞对内毒素非常敏感，如果血清中内毒素≥3EU/ml时，干细胞很容易死亡。很多使用者，在血清在试用前，就通过提早审核该批次《检测报告》，以决定是否入围进行试用。

2.养免疫细胞时，过高的内毒素可诱导免疫细胞释放炎症因子，抑制小鼠红细胞集落的形成等。

3.基因敲除相关的细胞实验，培养的细胞要尽可能保持其原始状态，任何引导细胞衰老或凋亡的试剂，都会让后续的实验结果“失之毫厘，谬以千里"。在准备血清和其他试剂时，选择极低的内毒素（最好≤1EU/ml），对实验至关重要；

4.原代培养、杂交瘤融合、细胞转染，或者肝细胞、神经细胞、内皮等难养细胞的扩增，这些都需要挑选好的血清给细胞以有力支持。因此，挑选更低的内毒素，是保证实验顺利的第一步。

5.实验室有些细胞，需要长期培养、长期冻存，或者经常复苏、经常培养的，血清会经常或长时间作用于细胞。为保证细胞的健康，都应该选用更低内毒素的血清，以避免内毒素长久对细胞的毒性影响。

总之，血清中内毒素含量过高，更容易导致细胞“亚健康"，造成数据不准，或细胞状态不良、老化、甚至死亡，导致试验中断失败。血清中的内毒素越低越好。