病毒性疫苗工业有了很大的发展,包括人用和兽用疫苗。
在品控上,我国药典有详细的规定。其中,规定了生产用细胞的培养上清、病毒收获液、检定细胞等不得含有支原体。
什么是支原体?
支原体(mycoplasma)是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型微生物,大小为0.1~0.3微米。支原体广泛存在于环境中。
虽然多数支原体不致病,但也有少部分对人有致病作用,例如:肺炎支原体、溶脲脲原体、人型支原体、生殖器支原体等。
因此,人用、兽用疫苗生产过程中,用细胞收完病毒液后,一定要对样品是否被支原体污染进行检测。
支原体检测方法
支原体在光学显微镜下很难被发现看见,因此,需要用到一些分子实验检测手段,PCR法(含qPCR技术)、恒温扩增法、DNA染色法、培养法、支原体酶检测法、ELISA法,以及细胞感应变色法等。
这些方法各有长短,有的结果直观,有的省时,有的精确,有的灵敏度高。因此,这些方法应取长补短。
综合各方面因素,推荐大家在收完病毒液后,取一部分样品,进行PCR检测。
与其他方法相比,PCR检测法有以下几个优点:
1、灵敏度高,一般来说,设计出色、质量过硬的支原体PCR检测Kit,能达10CFU/ml的检测限。
2、有内控对照,可反映检测过程是否正常。
3、覆盖上百种支原体物种,不容易有假阳性和假阴性,操作也较为简便,不用再去培养细胞。
4、稳定性高,标准化生产的试剂盒,品质稳定,避免了试剂因素所产生的实验数据波动。
支原体检测
好物 /推荐
推荐使用德国MB公司生产的Venor®Gem qEP支原体检测试剂盒,与市场上其他产品相比,Venor®Gem qEP Kit有以下优势:
1、内控对照为独立包装,遵循欧洲药典和日本药典操作流程。
2、高特异性,一次检测即可涵盖所有常见易感染细胞的支原体物种(包括欧洲药典规定的9种支原体)。与细菌和真核DNA无交叉反应。
3、高灵敏度,最di检测限可达到≤10CFU/ml。
4、有相应配套的支原体基因组DNA和细菌基因组DNA,便于特异性验证。
5、有相应配套的支原体绝对定量标准品,便于最后定量检测。
6、畅销数年,赢得了许多科研人员以及企业的好口碑!