支原体检查的药典补充方法

在生物药和细胞治疗领域，支原体检测*，它是避免外源因子污染，保证产品质量的重要质控手段。

我国药典规定，有一些领域需要进行支原体检测。包括主细胞库、工作细胞库、生产终末细胞、检定细胞、病毒种子批和病毒收获液、细胞培养相关材料如培养基、胰酶、临床治疗用干细胞和免疫细胞、新生牛血清以及杂交瘤细胞等。

上药典规定的传统支原体检查方法为培养法和指示细胞染色法。该方法也为我国药典所采用。但这些方法也存在一些不尽人意之处，如所需时间较长，有的操作复杂等。有些支原体不容易培养，因而也存在漏检的情况。指示细胞染色法存在假阳性情况。

从2007年开始，欧洲药典、日本药典和美国药典，先后开始寻求支原体检查的其他方法，主要的就是核酸扩增技术，以PCR和qPCR方法为代表。国外也开发了符合欧洲药典、日本药典等药典规定的支原体PCR试剂盒和支原体检测 qPCR试剂盒，以及支原体DNA提取试剂盒，其检测限、特异性和耐用性均达到了这些药典的规定，因而能替代培养法和指示细胞培养法（DNA染色法）

由于支原体污染容易发生，且肉眼不易识别，因此常规监测和放行检测均是需要的。支原体检测产品生产商德国Minerva Biolabs公司(简称MB公司)提供有放行检测用支原体PCR试剂盒，qPCR试剂盒，支原体DNA提取试剂盒、支原体标准品（包括灵敏度标准品、特异性验证用标准品以及qPCR定量标准品）。支原体PCR试剂盒和qPCR试剂盒均经厂家全面验证（包括灵敏度、特异性和耐用性），达到欧洲药典（EP 2.6.7）和日本药典（JP G3）要求。每个批次产品均有厂家的质检报告（COA）。

我国药典2020版在《通则3301 支原体检查法》中也指出，除了培养法和指示细胞培养法（DNA染色法），“也可采用经国家药品检定机枸认可的其他方法。”

PCR方法操作简单，尤其是节省时间，以往十几天才能出结果，现在2-3小时即可得出，大大提高了效率，节省了等待的时间，而结果又十分可靠。

但该方法在使用时，除了需要试剂盒被生产厂家提前验证外，还需要使用者对试剂盒进行样本基质的适用性验证和操作验证。一旦过关后，就可以长期使用了。

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