细胞被支原体污染后，应该怎么办

 细胞培养过程中，由于实验环境、操作者鼻腔口腔、实验器材等很多地方都有支原体的存在。因此，细胞发生支原体污染的频率很高。

       同时，由于支原体直径很小，仅在180nm~350nm之间，只有通过电镜才能看到。因此，支原体污染不易被实验者肉眼发觉。

       而支原体污染是个循序的过程，普通抗生素对其无效。因此，被支原体污染的细胞会持续受到影响，导致实验数据不准确。

       本期文章中，我们介绍一下细胞被支原体污染后，*清除支原体的方法。

细胞被支原体污染，解决方案 

方法一：确认细胞已被支原体污染，终止试验，丢弃所有被污染的细胞和耗材。

       重新复苏细胞，注意选用未被污染的细胞株、血清和培养基，并规范操作。

方法二：对于珍贵的，样品不可再得的细胞，或价格昂贵的种子细胞，不但无法丢弃，而且作为种子细胞，还需要**支原体污染。

      此时，需选用特异性的支原体杀除剂，清除污染，保护细胞。

      目前世界上you效的方法是是德国的一款专li生物试剂，由Minerva公司生产，品名Mynox®。

      此试剂可在2-3小时内将支原体主动杀除。特别适合细胞保种。

      Mynox®为枯草杆菌中提取出的生物制剂，加入培养液中，可特异性地与支原体膜结合，改变膜通透性。通过此生物物理的方法，2～3小时内，即可把细胞中的支原体杀除掉。因为细胞膜结构与支原体膜不同，故Mynox®不会与细胞膜结合，因此无细胞毒性。

       注意：3小时后，需将此试剂洗脱，将细胞更换到新的培养耗材和培养液中，重新培养。

       此时，不应使用PCR方法检测细胞中支原体。由于支原体解体，故PCR结果为假性强阳性。

Mynox®杀除支原体功能强大有效，但价格较贵。

方法三：对于已耗费很多时间，大量扩增起来的细胞，或经过基因转染、体外刺激等大量工作处理过的细胞，如果发现细胞被支原体污染了，怎么办？此时由于前期工作量巨大，使操作人员无法丢弃已有细胞。

但由于价格原因，又无法使用方法二提到的昂贵试剂杀除细胞上的支原体，

同时，实验人员还需要清除细胞上的支原体污染，让实验得以往下推进，以终获得准确的实验数据。

此时，实验者可选用对支原体*的抑制剂，通过对细胞的前期处理，中期加药，逐步通过4代左右的培养，得以将支原体污染*清除，确保试验顺利推进，结果准确。

*此类试剂众多，笔者周围的实验人做过很多尝试，其中效果确切且性价比较高的当属德国Minerva公司的ZellShield®祛除剂。

它的原理是：通过抑制支原体增殖中DNA和蛋白的合成，达到抑制新的支原体增殖的目的。属复合型的新型抗生素。

注：使用ZellShield®时，不需使用链青霉素。

操作步骤：

第yi步：研究发现，98%的支原体污染发生在细胞间隙。因此，首先要把细胞消化下来，放入离心管，悬浮冲洗，离心，弃上清，反复三次。此时可将细胞上大部分的支原体去除，为进一步加药抑制做好准备。

第二步：培养液中加入1%的ZellShield®，细胞进行正常培养。新的支原体增殖受到抑制，旧的支原体随着细胞的换液逐步减少，通过4代左右的培养，细胞中的支原体基本可被*清除。

此试剂价格约2800元/50ml，1%浓度使用，可保证大量细胞的实验得以顺利推进。性价比较高，但祛除过程时间稍长。

有些细胞保种中心，当珍贵细胞被支原体污染后，会将Mynox®和ZellShield®结合使用，效果确切，结果令人满意。

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