现在，PCR试剂盒常用于各种检测。其中di检出限是PCR试剂盒一个重要的参数。PCRdi检出限就是所能检测到的靶标的di值。di检出限的确定应通过定量标准品来完成。定量标准品一般是经过严格标定拷贝数的阳性DNA，梯度稀释后进行一系列的检测，每个梯度做8个复孔，终确定条带能否观测到或确定Ct值。

 示例. PCR定量标准品（支原体）（Minerva Biolabs）

接着可用Reed-Muench公式计算方法的检测限（LOD50），lgLOD50=距离比例×稀释对数质检的差+高于50%检出率的稀释度的对数。距离比例=（高于50%检出率的百分数-50%）/（高于50%检出率的百分数-低于50%检出率的百分数）。也可使用Excel软件在回归分析中，自动计算LOD值（Data>Data Analysis>Regression，选中X，Y值）

PCRdi检出限相当于方法的灵敏度，它与DNA模板的质量（包括是否有杂质）、整个PCR反应体系的性能优化（包括反应缓冲液、酶的功能、引物序列、引物浓度）、PCR程序条件的设定都有关系。有人采用巢式PCR，的确使得方法的灵敏度更高，但同时也增加了反应的复杂性和反应时间。

总之，PCR具有足够低的检测限，才能保证不会发生漏检。因此，在方法学意义上，di检测限应受到足够的重视。

参考文献：

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