PCR检查支原体是对药典方法的重要补充

支原体是导致体外细胞污染的重要污染源。用于生物制品生产的细胞基质或治疗性细胞。产品被支原体污染后，支原体或支原体代谢产物可进入人体，并对人体产生严重危害。因此，对支原体污染的有效检测是确保细胞基质及治疗性细胞产品质量的前提。

支原体传统检测方法为培养法和指示细胞染色法，这两种均是“药典方法”。但缺点是耗时长，灵敏度低。此外，这两种方法均无法明确所感染支原体的类型。

因此，采用PCR或qPCR检测支原体的高度保守序列，用于制药工业的放行检测，逐渐成为一种趋势。当然，核酸扩增法也存在一定的问题，因为它检的不是活的支原体，而是支原体的DNA。另外，它容易受到样本基质中的物质干扰，如果灵敏度达不到，有时容易漏检。而培养法的问题是，有些支原体无法在培养基上生长，因此也不会被发现。而核酸扩增法可以覆盖100多种支原体，且大大节省时间，并且扩增产物还可测序，以终确定污染支原体的物种，增加可追溯性。因此还是值得大力推广。

现在，市面上有些商品化试剂盒可以挑选，但需要注意它们应达到欧洲药典或日本药典标准，例如灵敏度、耐用性和特异性方面，需要经过全面验证。下面以德国MB公司的试剂盒（Venor®GeM qEP）为例，对这类试剂盒略做介绍。

该试剂盒扩增柔膜体对应的16S rRNA上的特异序列， 而真核细胞和其他细菌DNA不会被扩增。
 
试剂盒可同时对细胞培养上清筛查以及那些需要遵循欧洲药典和日本药典放行检测。整个检测小于3小时。和一些生化和细胞学方法相比，PCR具有更高的灵敏度和准确性。
 
试剂盒包含所有必要的PCR组分，包括引物和探针。其中内控DNA可用于鉴定PCR抑制或DNA抽提问题带来的假阴性。内控DNA可直接加到PCR预混液里，或加到DNA抽提之前的样本中。它可用于验证DNA抽提和qPCR扩增过程。内控对照的扩增结果在560nm检测（HEX通道），而支原体的扩增在520nm检测（FAM通道）。
 
试剂盒包括dUTP，它替代dTTP，方便用尿嘧啶DNA糖基酶（UNG）监视假阳性。该试剂盒不包含UNG。

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