胎牛血清主要的作用就是提供基本的营养物质以及提供接触和伸展因子,它
是采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血。此时胎牛各脏器正处生长分化阶段,血中含有丰富的生长发育因子,非常适合各种细胞的培养,一旦胚胎发育*这些因子自动消失。因此8个月胎龄以上的牛胚胎,已接近足月,不能作为胎牛血清的原料来使用。
有下列情况者,对血清内毒素应格外留意筛选:
1.养干细胞时,干细胞对内毒素非常敏感,如果血清中内毒素≥3EU/ml时,干细胞很容易死亡。很多使用者,在血清在试用前,就通过提早审核该批次《检测报告》,以决定是否入围进行试用。
2.养免疫细胞时,过高的内毒素可诱导免疫细胞释放炎症因子,抑制小鼠红细胞集落的形成等。
3.基因敲除相关的细胞实验,培养的细胞要尽可能保持其原始状态,任何引导细胞衰老或凋亡的试剂,都会让后续的实验结果“失之毫厘,谬以千里”。在准备血清和其他试剂时,选择极低的内毒素(hao≤1EU/ml),对实验至关重要;
4.原代培养、杂交瘤融合、细胞转染,或者肝细胞、神经细胞、内皮等难养细胞的扩增,这些都需要挑选好的血清给细胞以有力支持。因此,挑选更低的内毒素,是保证实验顺利的第yi步。
5.实验室有些细胞,需要长期培养、长期冻存,或者经常复苏、经常培养的,血清会经常或长时间作用于细胞。为保证细胞的健康,都应该选用更低内毒素的血清,以避免内毒素长久对细胞的毒性影响。
总之,血清中内毒素含量过高,更容易导致细胞“亚健康”,造成数据不准,或细胞状态不良、老化、甚至死亡,导致试验中断失败。血清中的内毒素越低越好。
因此,应选择那些内毒素含量低的血清(如Ausbian等),含量hao在3EU/ml以下。内毒素与血清加工制备时的生产卫生条件和工艺关系较大。
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