一些常见的限定化学成分培养基操作介绍

更新时间：2020-11-10 | 点击率：635

　　限定化学成分培养基是指培养基中的素有成分都是明确的,它同样不含有动物蛋白,化学限定培养基同样也不是添加了植物水解物,而是使用了一些已知结构与功能的小分子化合物,如短肽、植物激素等.这种培养基更有利于分析细胞的分泌产物.目前已经有适合于293细胞、CHO细胞、杂交瘤细胞生长的CDM问世。

　　一、常规培养和传代

　　1）在聚碳酸酯Erlenmeyer摇瓶中预平衡足量化学限定培养基1小时。

　　2）确定活细胞密度。

　　3）调整摇瓶工作体积（见英文说明书表2）。

　　4）接种细胞密度为3×105细胞/ml

　　5）5%CO2，37℃培养。

　　6）细胞密度达到15-40×105细胞/ml时，进行传代。通常间隔为3-4天。

　　7）如果细胞密度太低，或细胞在适应期不生长，则在4天后进行离心，更换培养基。

　　对某些细胞系，无须预平衡，而2-8℃的培养液效果更好。

　　二、从血清到无血清培养的过渡

　　1.离心足量细胞，细胞悬液密度为4-6×105细胞/mL，115×g，5分钟

　　2.细胞在含2%胎牛血清的培养基中重悬培养（必要时含6-8mM谷氨酰胺）。

　　3.细胞每2-4天传代或更换培养液。

　　4.在传代至少3次后降低血清浓度为0.5%。

　　5.细胞每2-4天传代或更换培养液。

　　6.在2-4代后血清浓度降为0%

　　7.继续培养直到细胞存活率＞90%

　　8.适应后的细胞应在化学限定培养基中以2-5×105细胞/ml接种。培养的细胞应在每3-4天稀释一次。由于HEK细胞容易积聚，培养物应搅动或摇晃，采用转瓶或摇瓶系统。