放射性同位素32P常用于细胞信号的转导研究。由于磷酸化是常见的蛋白修饰和信号转导形式,因此,32P标记的磷酸盐可掺入到被磷酸化修饰的蛋白中而被检测到,从而反映出磷酸化蛋白的浓度。在这一过程中,具体位点的磷酸化以及上游的作用信号都是待验证的因素。在该研究中,模型细胞、带有突变位点的转染质粒、捕获蛋白和磷酸化蛋白的标签抗体,以及放射自显影、电泳和蛋白免疫印迹是一连串的研究工具和方法。终显示为在这个位点上的磷酸化激活的确证(如下图)。
该实验避免了使用抗磷酸化的抗体,避免了因抗体的亲和力不强导致的实验失败。而放射性同位素又具有很高的灵敏度,因此尽管具有放射性,在许多领域仍有应用。
在这类实验中,由于要向细胞培养液中加入32P标记的磷酸盐,以掺入到细胞中,因此培养基中需要祛除固有的磷酸盐,同时又保留细胞所需的其他营养(如生长因子、细胞外基质等)。由于胎牛血清含有各类小分子,因此过滤掉小分子的透析胎牛血清常用于该类实验中的细胞培养。
北京缔一生物公司代理的Ausbian®透析胎牛血清选自澳洲低毒素批次的特级胎牛血清,经半透膜透析而成,祛除了10Kda以下包括磷酸盐在内的小分子,因而可更好地用于同位素掺入试验。
Ausbian®透析胎牛血清有100ml/瓶和500ml/瓶不同规格,每个批次提供完整的检测报告。全程冷链运输,不出现冻融现象,保证质量不受影响。
Ausbian®透析胎牛血清出厂前的质检包括:
1)理化检查(如pH值、血红蛋白、总蛋白、白蛋白、球蛋白、IgG和内毒素)
2)无菌检查,包括细菌、真菌、支原体检查
3)病毒检查,包括牛蓝舌病毒、牛病毒性腹泻病毒等十二项指标
4)生化检查,包括葡萄糖、甘油三酯和胆固醇
5)促细胞生长试验
6)BVD1型和2型抗体检查
总之,对于上述提到的一些特殊的细胞实验,应选用质量合格的透析胎牛血清来培养细胞,不干扰同位素掺入试验,又能保证细胞的培养效果。