梭菌显色培养基(膜过滤法)
M-CP Agar Base
货号 | 产品 | 规格 | 价格 |
M1354 | 梭菌显色培养基 M-CP Agar Base | 100g(1.4L) 500g(7.0L) | 询价 |
FD153 | 添加剂1 M-CP Selective Supplement I | 5管(2.5L) | 询价 |
FD154 | 添加剂2 M-CP Selective Supplement II | 5管(2.5L) | 询价 |
FD154A | 改良的添加剂2 M-CP Selective Supplement II, Modified | 5管(2.5L) | 询价 |
应用
用于欧盟指导委员会推荐的对水样中产气荚膜梭菌的分离和计数(采用膜过滤法)(3)
背景
产气荚膜梭菌是一种革兰氏阳性芽孢杆菌,是人畜共患病原菌,也是人畜肠道正常菌群,它广泛存在于自然环境如土壤、粪便和污水中(1)。产气荚膜梭菌分为五个亚型,其中一些亚型能分泌外毒素。产气荚膜梭菌作为条件致病菌,可导致水和食品污染,引发畜禽和人类疾病,如坏死性肠炎、腹泻、肠毒血症、气性坏疽和食物中毒
有报道指出,大肠菌群作为水质微生物学指标是不可靠的,而产气荚膜梭菌可作为一个水污染的指示菌。欧洲已将其作为水质卫生标准的补充条款,WHO已在水质检测中将其作为水质污染的微生物。产气荚膜梭菌数量与水污染程度有一定的相关关系。我国《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》GB8538—2016规定,天然矿泉水产品和水源水需检测产气荚膜梭菌。
目前,检测产气荚膜梭菌多采用培养基法和PCR法。实践证明,采用快速膜过滤技术和显色培养基(mCP培养基),简单、易行、可靠。
原理
M-CP平板是根据Armon和Payment的配方而成(2)。培养基中的胰蛋白䏡、酵母粉提供氮源营养,蔗糖提供碳源营养。溴甲酚紫为pH指示剂。吲哚β-D-葡萄糖苷为β-D-葡糖苷酶或纤维二糖酶的显色底物,二磷酸酚酞用于检测酸性磷酸化酶。添加的D-环丝氨酸和多粘菌素B(FD153)抑制伴随的其他菌群。厌氧环境也提供了进一步的选择性。当黄色(纤维二糖酶阴性)菌落在暴露于氨烟30秒后变为玫瑰红时,即可认为是产气荚膜梭菌。颜色鉴别有时是困难的,因此,可挑取典型菌落(黄变粉色)和非典型菌落(绿色或没变色)进行验证。验证试验可通过硫还原、革兰氏阳性、芽孢杆状、无动力性、硝还原、明胶液化、乳糖发酵和其他生化试验证实(4)。
培养基组分
成分 | g/L |
胰蛋白䏡 | 30.000 |
酵母粉 | 20.000 |
蔗糖 | 5.000 |
L-盐酸半胱氨酸 | 1.000 |
7水硫酸镁 | 0.100 |
溴甲酚紫 | 0.040 |
6水氯化铁 | 0.090 |
吲哚β-D-葡萄糖苷 | 0.060 |
琼脂 | 15.000 |
终pH值为7.6±0.2(25℃)
配制
35.6g干粉溶485ml蒸馏水。加热煮沸使培养基全溶。15磅121℃高压灭菌15分钟。冷却至45-50℃。用5ml无菌蒸馏水溶解添加剂1(货号:FD153),用10ml无菌蒸馏水溶解改良的添加剂2(货号:FD154A),将添加剂2(货号:FD154)室温孵育。在485ml无菌溶解冷却的梭菌显色培养基溶液中,无菌加入1管添加剂1(货号:FD153),1管添加剂2(货号:FD154)或改良的添加剂2(货号:FD154A),混匀,倒入无菌平皿。
质量控制
外观:淡黄至淡绿色松散粉末。
成胶性:牢固,与1.5%琼脂凝胶相当。
成品颜色和透明度:紫色透明至轻微不透明凝胶。
pH值:7.40-7.80
培养反应:在无氧条件下加入添加剂后,43-45℃孵育18-24小时,观察接种反应。
有机体 | 接种(CFU) | 生长 | 回收率 | 前一个批次的回收率 | 磷酸化酶试验 |
产气荚膜梭菌ATCC 12924 | 50-100 | 好-旺盛 | ≥50% | ≥70% | 阳性,黄色菌落* |
产气荚膜梭菌ATCC 13124 | 50-100 | 好-旺盛 | ≥50% | ≥70% | 阳性,黄色菌落* |
产气荚膜梭菌ATCC 10543 | 50-100 | 好-旺盛 | ≥50% | ≥70% | 阳性,黄色菌落* |
产气荚膜梭菌ATCC 12916 | 50-100 | 好-旺盛 | ≥50% | ≥70% | 阴性,蓝色菌落 |
双酶梭状芽胞杆菌NCTC 506 | 50-100 | 好-旺盛 | ≥50% | ≥70% | 阴性,蓝色菌落 |
伤寒沙门氏菌ATCC 6539 | ≥103 | 抑制 | 0% | 0% | 0% |
金黄色葡萄球菌ATCC 25923 | ≥103 | 抑制 | 0% | 0% | 0% |
大肠杆菌ATCC 25922 | ≥103 | 抑制 | 0% | 0% | 0% |
大肠杆菌ATCC 8739 | ≥103 | 抑制 | 0% | 0% | 0% |
暴露于氨烟30秒后菌落变为暗玫瑰色至淡粉红色。
储存
2--8℃
参考文献
1. Czeczulin J. R., Hanna P. C., Mcclane B. A., 1993, Infect. Immun., 61: 3429-3439.
2. Armon R. and Payment P., 1988, Can. J. Microbiol., 34:78-79.
3. Directive of the Council of the European Union 98/83/EC
4. Sartory D. P., Field M., Curbishley S. M., Pritchard A. M., 1998, Lett. Appl. Microbiol., 27:323-327.
产品引用文献
1. Kadam, A.M., et al., Pathogen removal from municipal wastewater in constructed soil filter.Ecological Engineering, 2008. 33(1): p. 37‐44.
2. Raed S. Al‐Wasify, A.‐S.A. Al‐Sayed, and M.M. Kamel, Sensitivity and Specificity of Chromogenic Media for Detection of Some Pathogens in Water. International Journal of Environment and Sustainability, 2013. 2(1): p. 1‐9.