现在,市面上能见到的显色培养基大多用于食品和临床,但HiMedia厂家生产的显色培养基覆盖面广,能用于供水行业和环境监测站。下面为您介绍一下。
显色培养基的评价常有多个指标,如灵敏度,特异性等,它们也与所检测的样本类型有关。生产厂家经常不提供这些指标。但一些第三方检测中心或研究机构对此则有相关研究,并发表在专业期刊上。
2011年,《学术研究期刊》发表了一篇对显色培养基的比较研究。作者来自埃及国家研究中心水污染研究部,他们通过用显色培养基检测了水中的大肠埃希氏菌O157:H7,对显色培养基进行了评价(见参考文献1)。
作者指出,在水中,E. coli O157:H7可以极低水平存在,伴随大量竞争菌群。传统方法需要超过48小时完成培养,同时还需进一步的生化鉴定和血清学鉴定。依据原理主要是SMAC平板,在麦康凯琼脂基础上用山梨醇替代乳糖,E. coli O157:H7不能发酵山梨醇。该方法存在一定的偏差,因为有些E. coli O157:H7菌株可以发酵山梨醇。
显色培养基的出现可改善这一检测方法。研究者采用HiMedia公司生产的HiCrome EC O157:H7 Selective agar。因为存在特异性显色底物,E. coli O157:H7菌落呈现深紫色,E. coli菌落则呈现淡粉色至淡紫色。
研究者收集了尼罗河地表水的60个水样本。收集水平遵照了200年APHA发布的指南。所有水样均收集在无菌的1L玻璃瓶中(Simax品牌,捷克共和国产),并在4℃条件下运输到实验室。所有样品在收集后6小时内进行细菌学检查。
研究用的E. coli O157:H7标准菌株编号为ATCC 43895。研究者除采用了HiMedia出的HiCrome EC O157:H7 Selective agar(简称HEC)外,还采用了美国Biolog 产的Rainbow agar O157(简称RB)。该平板为无色,在上面E. coli菌落呈现红紫蓝黑等不同颜色,E. coli O157:H7呈现深灰色至深黑色。而其他葡萄糖醛酸酶阳性菌株呈现红色或洋红色菌落。该培养基添加有新生霉素和亚碲酸盐。
研究遵循了2005年APHA指南,采用薄膜过滤法对E. coli O157:H7进行了检测和计数。滤膜放置在培养基上,37℃倒置孵育24小时。对典型菌落计数,单位为CFU/100 ml。菌落的进一步确证采用PCR法。终计算得出灵敏度(真阳性率)、特异性(真阴性率)、总有效率(即(真阳性+真阴性)×100/总数),并进行统计学分析(t检验)。
结果见表1、表2、表3和表4。
表1. 在不同培养基上,E. coli O157:H7标准菌株的菌落特征
菌株 | 培养基 | 阳性菌落 | 正确数 (%) | 假阴性菌落 | 假阴性数(%) |
E. coli O157:H7 | HEC | 深紫/紫红 | 30 (93.8) | 淡粉/淡紫 | 2(6.2) |
RB | 灰/黑 | 30 (93.8) | 不同颜色(如红紫蓝) | 2(6.2) |
表2. 非E. coli O157:H7菌株在不同培养基上的菌落情况
菌株 | 培养基 | 真阴性结果 (%) | 假阳性结果(%) |
E. coli O157:H7 | HEC | 10 (100) | 0(0.0) |
RB | 9 (90.0) | 1(10.0) |
表3. 培养基分离标准菌株的有效性
HEC | RB | PCR | |
真阳 | 30 | 30 | 30 |
真阴 | 10 | 9 | 9 |
假阳 | 0 | 1 | 1 |
假阴 | 2 | 2 | 1 |
灵敏度 | 93.7% | 93.7% | 96.7% |
特异度 | 100% | 90% | 90% |
有效率 | 95.2% | 92.8% | 95.1% |
表4. 60个尼罗河水样在不同培养基上E. coli O157:H7的假阳性率
分离株数量 | 假阳性数(%) | |
HEC | 80 | 5(6.25) |
RB | 80 | 8(10.0) |
可见,HiCrome EC O157:H7 Selective agar分离E. coli O157:H7具有更高的灵敏度和特异度,并已被PCR进一步确证。显色培养基不失为一种灵敏、快速、特异的方法,并且无须任何确证试验。
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