食品单增李斯特菌的特异性检测

李斯特菌为革兰氏阳性菌，包含有6种，但只有单核细胞增生李斯特菌导致人类疾病（具有高致死率），而伊氏李斯特菌只与其他哺乳动物疾病相关。

单核细胞增生李斯特菌已在食品、环境和临床样本中被发现。其检测方法为培养法，在我国食品安全国标中有详细的描述。该方法灵敏度高，堪称为金标准。从样本收集开始，对于阴性结果的得出，通常需要3-4天，阳性结果通常需要5-7天。对于食品企业，则希望检测结果能更快出来。

食品单核细胞增生李斯特菌的检测，受到如下这几个因素的影响：即竞争菌群的干扰、目标菌滴度较低，以及食品成分所带来的抑制和干扰。因此，以抗体和分子手段为基础的方法也开发出来，大部分具有同等的灵敏度，但更快，同时在48h内能完成检测。

然而，在选择方法时要注意，大部分检测方法无法区分不同的李斯特菌物种。在不同的李斯特菌物种中，只有单增李斯特菌是人类的病原菌，因此需要采用物种特异的方法。同时，也应注意，并不是所有的单增李斯特菌菌株都导致人类疾病。在13种单增李斯特菌的血清型中，只有3种即1/2a，1/2b和4b导致90%以上的人类病例。

表1.实验室鉴别单增李斯特菌的主要试验

在传统培养法中，步是增菌。增菌的作用是提高分离的灵敏度，使得25g食品样品中即使有1个李斯特菌也能被检测出来。该增菌过程是选择性的，即抑制无关菌群生长。其选择因子包括吖啶黄（抑制革兰氏阳性菌生长）、萘啶酸（抑制革兰氏阴性菌）和一种真核生物蛋白抑制剂，用于抑制真菌生长。其他抗生素包括头孢他啶和拉氧头孢和氯化锂。李斯特菌分离培养基有的还有七叶苷，因为李斯特菌属具有使七叶苷水解的特征反应。

显色培养基提供了一种简便的分离鉴定李斯特菌和单增李斯特菌的方法。它主要根据李斯特菌所含有的特异酶以及特定的糖发酵反应来进行的。通过采用李斯特菌显色培养基，单增李斯特菌有可能在24h后得到初步鉴定，而之前的Oxford培养基等传统型培养法则需要3-4天。显色培养基也适合大部分的食品类型。

毒力基因plcA，在单增李斯特、伊氏李斯特和斯氏李斯特菌中均存在，它编码磷脂酰肌醇磷脂酶C（PIPL-C），它常用于鉴别溶血性李斯特菌和非溶血性李斯特菌。L--磷脂酰肌醇（PI）被PIPL-C裂解产生不溶于水的脂肪酸，在溶血性李斯特菌菌落周围形成不透明的白色晕环。它和β-D-葡萄糖苷酶一起，构成了ALOA李斯特菌分离显色培养基的基础（下图）。在该培养基中，只有单增与伊氏李斯特菌有白色晕环。

图. HiMedia公司生产的李斯特菌显色培养基（ALOA法）（货号MV1540）

可疑菌落应进行鉴定，如革兰氏阳性染色，无芽孢杆菌，过氧化氢酶阳性，氧化酶阴性，28℃存在动力，37℃不存在动力。

生化鉴定试剂盒可进一步鉴定李斯特菌的物种。HiMedia提供了2款李斯特菌物种生化鉴定试剂盒（货号分别为KB012A，KBM003A，下图）。鉴定卡上包含了12个迷你生化反应，囊括了经典的生化鉴定试验。KBM003A多出动力学鉴定试验。

HiMedia公司生产的HiBio-ID菌种生化鉴定试剂盒

致病李斯特菌和非致病李斯特菌可通过它们的溶血反应或PIPL-C活性来鉴别。溶血反应是鉴别单增李斯特（溶血）和英诺克李斯特菌（不溶血）的常用试验。PIPL-C活性则可通过显色培养基检测。木糖和鼠李糖发酵则可将单增李斯特与伊氏李斯特和斯氏李斯特区分开来，单增是木糖（—）鼠李糖（+），伊氏和斯氏是木糖（+）鼠李糖（-）。丙氨酸肽酶是所有李斯特物种具有、单增李斯特菌不具有的一种酶，也可用于物种鉴别。

对于其他检测方法，为保证灵敏度，仍然需要增菌。免疫法检测阈限较高，而核酸扩增法更为灵敏，但PCR反应容易被食品中的成分所抑制，并且不能区分活细胞和死细胞。增菌可以稀释那些抑制成分，并且使检测的核酸是来自生长的细胞。核酸法的特异性更强，并且速度也较快，并以qPCR定性为主。

在采用新检测方法之前，有必要对方法进行验证。在上，ISO和AOAC的标准可以参考。

HiMedia公司是微生物产品生产商，一直致力于微生物培养基和细胞培养基的研发和生产，其显色培养基有80多种，涵盖各个领域，包括无动物源成分及化学限定的，并具有WHO GMP认证、ISO9001：2008，ISO13485：2003认证，CE认证和FDA注册登记。其产品行销140多个国家。

缔一生物作为HiMedia公司在中国的代理商，在微生物培养和检测领域，一如既往地为您带来的服务。