显色培养基与临床微生物学的整合

对于许多微生物学实验室，对微生物快速检测和鉴定的能力至关重要。其中，显色培养基即是一种得力的工具。和传统培养基相比，显色培养基的功能越来越多，它已不再仅仅是一种分离培养基，而且可用于初步鉴定和筛选。它在混合菌群中能更好的鉴别目标菌，有时是在属的水平上，有时则达到种的水平。通过加入抗生素或其他选择因子，显色培养基可筛选多重耐药和带毒力因子的微生物，并能很方便地和其他自动化的设备或分子方法相结合。

显色培养基针对的是微生物体内的特异性酶，包括糖苷酶、α和β-半乳糖苷酶、葡萄糖苷酶、β-葡萄糖醛酸酶和纤维二糖苷酶。其他酶包括：磷酸酶、硫酸酯酶、酯酶、氨肽酶、脂肪酶如磷脂酰肌醇-磷脂酶C（PI-PLC）和磷脂酰胆碱-磷脂酶C（PC-PLC）。一些鉴别酵母的真菌显色培养基针对的则是β-氨基己糖苷酶或L-脯氨酸氨肽酶或β-半乳糖氨基酸酶。一旦底物被微生物使用，连接的显色原（通常是无色的）将被水解或氧化/还原而产生特异颜色。理想情况下，显色原、底物和水解终产物不能对微生物生长有抑制。

有一些因素会影响显色的灵敏度和特异性：如加入显色原的浓度、底物类型、蛋白胨、缓冲液（离子强度）、添加剂等。孵育时间、孵育温度和环境气体成分对显色也很重要。一些显色原对光敏感，使得培养基需要特殊的存储条件。

在制备好的成品显色培养基中，即使保存在2-8℃，抗生素也容易发生变质，因而需要批次的质量监控。随着孵育时间的延长，因为存在抗生素和其他选择因子的不稳定性，抗生素变质的速率也可能变化。不同厂家的显色培养基因其*的配方也会存在差异。同时对于使用不同的抗生素组合，应广泛检查其对共生菌的影响，特别不要局限于国内的菌株，而应覆盖所有主要的菌株。

许多临床样本可直接在显色培养基上培养，孵育时间为18-24h。常见的目标致病菌有：金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、沙门氏菌属、弧菌属、李斯特菌、不动杆菌属、大肠埃希菌、大肠埃希菌O157：H7、肠球菌属、克雷伯菌/肠杆菌属/柠檬酸杆菌/沙雷菌属，来自其他肠杆菌科的变形菌属和念珠菌属。

显色培养基还可以对微生物耐药和毒素进行检测，快速而准确。显色培养基加入了抑制因子（如抗生素头孢西丁、头孢泊肟、万古霉素等）和/或其他选择因子如叠氮钠（针对革兰氏阴性菌），以去除共生菌或竞争性可疑菌株，提高了特异性，使得只有耐药菌能生长。目前能检测的耐药菌包括MRSA、VRE、ESBL、KPC以及质粒介导的AmpC β-内酰胺酶抵抗的大肠埃希菌、克雷伯菌。还有一些真菌显色培养基和快速海藻糖试验结合，用于鉴定光滑念珠菌，并用于快速鉴定对氟康唑敏感的血培养阳性念珠菌。

在一些分子研究中，显色培养基替代了DNA抽提，特别是对于一些比较难获得的临床样本。在培养18-24h后，显色的耐药菌落或产毒菌落可进一步表型分析或PCR分析，检测耐药基因或毒素基因，例如对导致软组织感染的金黄色葡萄球菌，或导致侵入性肺炎的社区获得性MRAS的潘顿-瓦伦丁杀白细胞毒素的检测。

在临床样本中，对致病菌进行筛查是费时的，使用血清学和生化试剂也导致成本较高。而显色培养基不需要昂贵而特殊的设备，省去辅助试剂和节省劳力，快速、简单、实用、经济，必会展开进一步的应用。

参考文献

John Merlino. Applications and integration of chromogenic culture media in clinical microbiology. Microbiology Australia. 2010, Sep.: 127-130

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