绿脓杆菌在自然界中的水、空气和土壤中均有存在,可产生多种外毒素和内毒素,常引起人皮肤化脓感染。因此,水和化妆品常需检测铜绿假单胞菌。在《GB/T 7918.4-1987 化妆品微生物标准检验方法 绿脓杆菌》中规定,化妆品不得检出铜绿假单胞菌。
对铜绿假单胞菌分离选择用培养基在国标中有具体的规定。但近年来,随着显色培养基的逐步使用,显色培养基的优势逐渐显现出来。它利用细菌特异性酶与显色底物发生反应,直接通过菌落有暗色初步鉴别微生物,已成为一种非常实用的新型快速分离方法。
有人对传统分离选择培养基(如CN选择培养基,十六烷*基溴化胺琼脂,乙酰胺琼脂,CFC琼脂)进行过检测和评论1,发现在CN、CFC 培养基上,铜
绿假单胞菌呈黄绿色,恶臭假单胞菌呈黄色,两类菌颜色相近,并不容易区分,因此会增大鉴定工作量。十六烷*基溴化铵琼脂上,铜绿假单胞菌与恶臭假单胞菌形态颜色均相似,不适宜作为选择性培养基使用。乙酰胺琼脂、假单胞菌显色培养基能明显将铜绿假单胞与恶臭假单胞菌、荧光假单胞菌区分开,但乙酰胺琼脂上目标菌菌落较小,可能会影响实验结果观察与分离。
因而,作者认为,十六烷*基溴化胺琼脂培养基对假单胞菌属特异性较差,CFC 琼脂选择性较弱,而乙酰胺琼脂则存在目标菌生长速度过慢,增菌时间长,缺乏时效性等问题,且 CN 选择性培养基在样品污染量大时,容易出现菌落成片无法计数的情况。
HiMedia公司开发的绿脓杆菌显色培养基,系用荧光法分离铜绿假单胞菌。铜绿假单胞菌分泌几种色素,包括绿脓素(蓝绿色)、荧光素(黄绿色,发荧光)、红脓素(棕红色)。King等人开发了King A培养基,用于提高绿脓素和红脓素的产出,以及King B 培养基用于提升荧光素的产出。该显色培养基用植物源蛋白胨取代动物蛋白胨,并基于King 等人的配方而成(荧光混合剂除外)。培养基中的溴棕*铵抑制其他菌群生长。它作为季铵类化合物和阳离子表面活性剂,使铜绿假单胞菌之外的细菌菌体释放出氮和磷。铜绿假单胞菌裂解荧光底物,使UV下发射荧光。
在该培养基中,铜绿假单胞菌UV下发出荧光(下图),而嗜麦芽窄食单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均被抑制。
HiMedia公司是微生物产品生产商,一直致力于微生物培养基和细胞培养基的研发和生产,具有WHO GMP认证、ISO9001:2008,ISO13485:2003认证,CE认证和FDA注册登记,尤其通过CE的体外诊断注册。其产品行销140多个国家。
缔一生物作为HiMedia公司在中国的代理商,在微生物培养和检测领域,一如既往地为您带来的服务。
参考文献
1. 伊鋆,何平,杨明,卢跃鹏,郦娟,江小明. 五种选择性培养基检测铜绿假单胞菌效果比较. 现代预防医学. 2017, 44(15): 2829-2835