大肠杆菌计数标准解读ISO 16649-1：2018

大肠杆菌和粪大肠菌群的计数一致是一项食品卫生的常规检测。2018年，ISO发布了新版ISO 16649-1：2018，即“食品链的微生物学——β-葡萄糖醛酸酶阳性大肠杆菌计数的水平方法.第1部分 使用膜和5-溴-4-氯-3-吲哚β-D-葡萄糖醛酸酐在44℃的菌落计数技术”。

ISO 16649-1:2018取代的是ISO 16649-1:2001,在如下方面有修改：

1）环境和初级食品生产阶段的取样

2）对于TBX培养基（胰胨胆盐葡萄糖醛酸酐琼脂）孵育时间规定至少20h

3）添加了培养基和滤膜的性能试验

4）为了安全性，不再推荐DMSO来溶解葡萄糖醛酸酶的显色底物BCIG

5）无机盐改良谷氨酸盐琼脂（MMGA）的组成进行了调整

该标准适合食品、饲料、食品生产车间的环境样本等。

在流程上，可分为如下几步：

1）复苏。

用无菌镊子夹一张膜放到MMGA培养基的干燥表面，避免膜下产生气泡。可用涂布棒把膜压平。用无菌移液器将1ml样本液加到膜中央，使用涂布棒将接种液均匀分布到整个膜表面。将平板在室温静置15分钟，直到接种液浸透整个膜。再孵育4h±0.25h，37℃，膜/琼脂表面朝上。

2）分离。

使用无菌镊子将膜转移到TBX培养基上。在孵箱中44℃孵育20h~24h。有蓝色或蓝绿色菌落则为葡萄糖醛酸酶阳性的大肠杆菌。选择典型菌落数150的平皿进行计数。

3）结果计算和报告

世界微生物培养基生产商HiMedia公司提供有ISO的培养基，如无机盐改良谷氨酸盐琼脂（Minervals-modified glutamate agar，MMGA），货号为M643I，配方与ISO 16649-1:2018的*一致，只有氯化铵需用户自己准备。对于TBX培养基，HiMedia公司提供有HiCrome™ E. coli Agar，货号M1295I，配方与ISO 16649-1:2018的*一致。在该培养基中，大肠杆菌为蓝绿色菌落，沙门氏菌为无色菌落，葡萄球菌被抑制生长（见下图）。

HiMedia公司从1975年起即致力于微生物培养基和细胞培养基的生产和研发，具有WHO GMP认证、ISO9001：2008，ISO13485：2003认证，CE认证和FDA注册登记，尤其通过CE的体外诊断注册。其产品行销140多个国家。

缔一生物作为HiMedia公司在中国的代理商，在微生物培养和检测领域，一如既往地为您带来的服务。