ISO关于沙门氏菌检测方法的说明

2017年，ISO出台了一个沙门氏菌检查的标准，即ISO 6579-1-2017 食物链的微生物 沙门氏菌检测计数和血清分型的水平方法。第1部分是沙门氏菌属的检测。该方法面向的是食品、乳与乳制品、动物饲料、动物粪便和食品加工处理的环境样品。下面将该方法简要描述一下：

步：预增菌。

ISO推荐的仍是缓冲蛋白胨水（简称BPW）（非选择性液体培养基）：先将BPW放置室温。接种后，34-38℃孵育18h。如果是大量样品（1L以上），则建议先将BPW预热至34-38℃，再和样品混合。ISO指出：沙门氏菌经常小量存在，并伴随有大量的其他肠杆菌科成员。预增菌的目的是用于能检测到低丰度的沙门氏菌或受损伤的沙门氏菌。

第二步：选择性增菌。

ISO推荐是两种选择性增菌培养基，同时使用。种是含大豆的RVS肉汤或MSRV琼脂（Rappaport-Vassiliadis琼脂），41.5℃孵育24h，第二种是MKTTn肉汤，37℃孵育24h。ISO还指出，MSRV琼脂适合有动力的沙门氏菌，不适合无动力的沙门氏菌。

第三步：分离。

即接种到推荐的两种选择性固体培养基上。种是XLD琼脂，37℃孵育24h以上。典型菌落为黑色中心，红色轻微透明光晕。但有个别例外，即H2S阴性沙门氏菌变种为粉色菌落，深粉色中心；乳糖发酵阳性的沙门氏菌为黄色菌落，有或没有黑色中心。ISO推荐再选用一个选择性培养基进行分离。我们推荐HiMedia公司生产的显色培养基HiCrome 沙门氏菌HiVeg 琼脂（货号MV1296）HiCrome是HiMedia显色培养基的标识，HiVeg是培养基无动物成分，用植物蛋白胨取代动物蛋白胨的标识，这样培养基无动物源成分带来的疯牛病风险。

该显色培养基建立在Rambach琼脂基础上，沙门氏菌菌落（包括肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、伤寒沙门菌）为淡紫色，有光晕，大肠杆菌为蓝色菌落，奇异变形杆菌为无色菌落（见下图）。该培养基特异性高，接种50-100CFU沙门氏菌，回收率≥50%。

第四步：验证。

用生化试验或血清学试验验证。使用生化鉴定试剂盒（鉴定条）则相当方便，我们推荐HiMedia生产的沙门氏菌鉴定试剂盒（KB011）。该鉴定条集成了7项生化试验和5项糖发酵试验，可鉴定18种沙门氏菌，许多是鉴定到种。对于菌株的鉴定，则应进行血清学试验。

（HiMedia生化鉴定条示意图）

“ISO 6579-1-2017”和我国《GB 4789.4-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》相比，在增菌上和分离步骤上，都有一些不同。尤其是分离步骤进行了简化。因为市面上的沙门氏菌显色培养基众多，ISO只是推荐再选用一个选择性培养基进行分离，而没有明确指出是哪一类或是原理是什么。但HiMedia开发的沙门氏菌显色培养基显然是值得注意和推荐的一款，其沙门氏菌落上带有红色光晕，尤其容易辨识。