方便双歧杆菌计数的显色培养基

近年来，双歧杆菌作为益生菌，越来越得到人们的重视。一方面，在生产中，需要进行双歧杆菌的培养，另一方面，在酸乳等食品乳品中，又需要双歧杆菌的计数。因为双歧杆菌只有活菌数达到106 CFU/mL以上时，才能发挥正常生理功能；数量太少，则达不到保健的效果。

在培养双歧杆菌时，需要了解双歧杆菌为专性厌氧菌，适宜生长的环境pH值为6.7~7.0。它为革兰氏阳性，无运动性，包括至少25个种，适合生长温度在25℃-45℃。双歧杆菌对碳水化合物的代谢终产物为乳酸和醋酸。

双歧杆菌原本可以作为指示菌，因为它在粪便中出现的频率非常高。有人研究发现，婴儿出生后母乳喂养一周，肠道中双歧杆菌数可占92%，而健康成年人仅有10%。但双歧杆菌生长缓慢，且严格厌氧，培养很不方便，因此并没有作为粪便的指示菌。

当今食品发展的趋势是，应用双歧杆菌越来越多，且乳杆菌与双歧杆菌同时添加。这种混合发酵，多见于酸奶与保健品。在酸奶中，常应用嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌在牛奶中发酵 , 以使产品具有酸奶特有的细腻圆润的凝乳状态。而如果只单一使用双歧杆菌发酵，则风味与口感不佳。但混合发酵也带来一个问题，即给双歧杆菌的计数带来麻烦。一方面，双歧杆菌与乳杆菌都属于乳酸菌，性能接近，另一方面，双歧杆菌随着传代次数增多，会发生变异成杆状，因此通过镜下形态鉴别不太可靠。如果能有一款商品化的双歧杆菌显色培养基，则可给双歧杆菌的鉴别和计数带来极大的便捷。

世界微生物培养基生产商HiMedia开发有一款双歧杆菌显色培养基（品名：HiCrome™
Bifidobacterium Agar），它可用于双歧杆菌与乳杆菌混合发酵的酸乳等制品菌落的鉴别计数。该显色培养基中含有特别蛋白胨、牛奶蛋白、氯化钠、显色剂和琼脂。牛奶蛋白能检测双歧杆菌的酪蛋白水解活性，从而使菌落表现出光晕。显色剂则可鉴别乳杆菌和双歧杆菌。乳杆菌属通常表现为绿色菌落和雾状背景（发酵乳杆菌例外，菌落为粉色，无光晕），双歧杆菌则根据物种不同，菌落颜色也有所区别：婴儿双歧杆菌表现为深蓝色至蓝绿色菌落。短双歧杆菌表现为粉红色菌落，并且有光晕。据了解，双歧杆菌在成人体内的菌种主要是青春双歧杆菌和长双歧杆菌。在婴儿为婴儿双歧杆菌和短双歧杆菌。

图. 右上为婴儿双岐杆菌ATCC 25962，左上为短双歧杆菌ATCC 15698，下为植物乳杆菌ATCC 8014

双歧杆菌在许多制品以及人和动物肠道内，大多与其他菌（如乳酸菌）混合生长，而且生长特点相近，很难区分。要对其进行计数，需设计特定的选择培养基。双歧杆菌显色培养基一方面要求能保证双歧杆菌的生长，同时要求选择性高，对杂菌的抑制性强，双歧杆菌菌落呈现显著的颜色或形态上的特征。传统培养双歧杆菌培养时间较长，需要 96小时才能出结果，而该显色培养基则只需在无氧条件下35-37℃孵育48小时，即可知道准确结果。显色培养方法的特异性也很高，能够保证培养结果的准确性。

HiCrome™
双歧杆菌显色培养基能快速有效地检测双歧杆菌，这对于辨别产品中添加双歧杆菌的数量具有重要意义。HiCrome™
双歧杆菌显色培养基能实现一步培养直接计数，基本能够满足实验室对双歧杆菌初步检测计数的需要，特别适合不拥有大型细菌鉴定仪的中小企业和第三方实验室。

图. 短双歧杆菌

图. 植物乳杆菌