2017年版ISO 22964克罗诺杆菌属检测标准解读

阪崎克罗诺杆菌名称经历了数次变化。早因产生黄色素，被称为黄色阴沟肠杆菌。后来发现该菌与阴沟肠杆菌有所不同，又更名为“阪崎肠杆菌”。2008年，Iversen等人通过分子生物学技术（如多位点序列分型即MLST）鉴定，将该菌扩大为属（克罗诺杆菌属）。目前，克罗诺杆菌至少有7个种。其中阪崎克罗诺杆菌与人的关系为密切。

克罗诺杆菌耐干燥环境，可在婴幼儿奶粉、豆粉、营养粉、草本茶、淀粉中存活，在海水中也存在。有报道，在海产干制品中的检出率可达17.83%。又有人在成都市某城区超市、农贸市场、食品小吃店中调查，发现100份食品样品中有32份样品分离出克罗诺杆菌，分离率为32%。

克罗诺杆菌耐高温，耐紫外线，能产生生物膜对消毒产生抵抗。同时，阪崎克罗诺杆菌对婴幼儿的感染致死率高，因此，在婴幼儿食品和乳品中进行检测非常重要，我国食品安全国家标准在这方面也有规定。

ISO/TS 22964：2017是上发布的一版克罗诺杆菌属检测标准，它取代了2006年版。主要变动是：将检测范围从阪崎克罗诺杆菌扩大至整个克罗诺杆菌属，样本包括人类食品、动物饲料和食品生产区的环境样本；mLST肉汤被克罗诺杆菌选择性肉汤（CSB）所取代；阪崎肠杆菌分离琼脂被克罗诺杆菌分离显色琼脂（CCI）所取代；生化验证试验有修正。

ISO/TS 22964：2017制订的克罗诺杆菌属检测过程大致为：1. 预增菌。取样，在缓冲蛋白胨水(BPW)中34℃-38℃培养18h±2h；2. 增菌。转移0.1ml预增菌液至10ml CSB，混匀。41.5℃培养24h±2h。3.接种。用接种环接种10ul菌液至克罗诺杆菌显色培养基（CCI）平板上，41.5℃培养24h±2h。4.挑出典型菌落，在TSA上纯培养并进行生化验证。

CCI平板上典型的克罗诺菌落为小至中等大小（1mm~3mm）蓝色或蓝绿色菌落。非克罗诺菌落则为白色，或白色同时中心为绿色或灰色、黑色。有些非克罗诺菌为黄色或红色。

常见的生化验证包括氧化酶、赖氨酸脱羧、鸟氨酸脱羧、四种糖发酵产酸（阿拉伯糖、山梨醇、蔗糖）、

4-硝基苯--D-葡吡喃糖苷的水解。其他如伏普、甲基红试验等为可选。克罗诺杆菌属为氧化酶反应阴性，葡吡喃糖苷的水解和蔗糖发酵产酸阳性，而赖氨酸脱羧和山梨醇产酸均为阴性。

关于克罗诺杆菌选择性肉汤（CSB），微生物产品供应商HiMedia公司提供有商品化脱水培养基Cronobacter Screening Broth（货号M1786），1升中加入1管万古霉素（货号FD233）制备为*培养基。HiMedia公司也提供有克罗诺杆菌显色培养基（CCI），其组成和ISO/TS 22964：2017*一致，货号为M2062I。同时，HiMedia公司也提供有4-硝基苯--D-葡吡喃糖苷，货号为RM10294-1G，欢迎选购。

图. 克罗诺杆菌显色培养基（CCI, 货号为M2062I）

在ISO/TS 22964：2017的附录3中，还列表列举了阪崎克罗诺杆菌与其他相似菌的鉴别特征。表中的数字代表者阳性菌株的比例。其中阪崎克罗诺杆菌与阴沟肠杆菌的区别在于：4-硝基苯--D-葡吡喃糖苷水解试验，阪崎克罗诺杆菌（+），阴沟肠杆菌（基本-）；山梨醇发酵，阪崎克罗诺杆菌（-），而阴沟肠杆菌(+)，可供检测人员参考。