食源性大肠杆菌 O157：H7 的检测方法简介

随着国内生活水平的提升，食品的消费量呈逐年上升的趋势，但同时也面临着食品安全方面的威胁。大肠杆菌O157:H7是一种重要的食源性致病菌，属于肠杆菌科埃希氏菌属，是肠出血性大肠杆菌中具代表性的血清型。大肠杆菌 O157∶H7 的主要研究方法有传统分离鉴定法、分子生物学法和免疫学法，根据同种研究方法的相似原理，搭建不同的检测平台，来构建致病菌的多种检测手段。

传统分离鉴定法

传统分离鉴定法需要通过液体培养基培养提前增菌 10～20 h，然后将其定量涂布到培养皿上，37 ℃培养 18~24 h。利用绝大多数大肠杆菌O157∶H7 菌株不发酵山梨醇的特性，可以在山梨醇麦康凯琼脂（SMAC）培养基上进行初步分离，培养的大肠杆菌 O157∶H7 菌落呈无色半透明。但有其他血清型的大肠杆菌 O157 和革兰氏阴性菌如变形菌等也不发酵山梨醇，会造成假阳性。

缔一生物向您介绍一款上HiMedia公司的生产的大肠杆菌O157：H7显色培养基（CT-SMAC平板）货号：M1340。该培养基中含有山梨醇和BC指示剂，不含乳糖。大多数大肠菌群菌株 会发酵山梨醇，产生酸。当pH值低于6.8时，培养基中的中性红会变成粉红色。同时普通大肠杆菌具有ß-D葡萄糖醛酸酶，当遇到培养基中BC指示剂时，会呈现蓝绿色。当两种颜色叠加时，普通大肠杆菌在此种培养基中，会呈现蓝紫色。用于从食物和动物饲料中选择性分离大肠杆菌O157:H7。

大肠杆菌O157:H7不发酵山梨醇，也不具备ß-D葡萄糖醛酸酶活性，因而在此种培养基中产生的菌落为无色。如果需要，此培养基还可添加 碲酸盐头孢克肟添加剂（FD147），可使培养基更具有选择性。亚碲酸钾可使大肠杆菌O157选择性生长，并抑制嗜水气单胞菌和普罗维登菌的生长；头孢克肟可抑制变形杆菌。

传统分离培养法的检测费用低廉，在食品大肠杆菌 O157:H7 的检测中作为主要手段，广泛应用于检测领域。

分子生物学检测方法

大肠杆菌 O157:H7 的全基因组已获得，并收录在 Genebank 中。在此基础上，大肠杆菌 O157:H7 的检测衍生出了一系列分子生物学方法，主要有聚合酶链式反应（PCR）技术（包括普通 PCR、实时荧光 PCR、多重 PCR 等）、基因芯片技术和噬菌体检测技术。

用分子生物学法检测大肠杆菌 O157:H7，检测过程相对简单，检测灵敏度较高，但因大肠杆菌 O157:H7 一般在食品中的污染量很低，为保证检测结果的准确性仍需要一定的增菌培养过程，且其检测的特异性会一定程度上受食品成分的影响。

免疫学检测方法

例如免疫胶体金试纸检测法 免疫胶体金层析技术以硝酸纤维素膜为载体，以胶体金作为标记物，样品滴加至微膜孔后，在毛细管作用下，通过抗原抗体特异性结合，利用胶体金颜色反应，达到检测抗原或抗体的免疫标记技术。该方法以其检测快速、检测成本低、灵敏度高、适合现场检测等优点在检测领域中快速发展，但易出现假阳性结果。

利用免疫学检测技术可大大缩短检测时间，提高检测灵敏度，但需要高特异性的抗体，同时对于不同种类的食品需要优化不同的对应体系以达到更好的检测效果。